小鼠原代肺内皮细胞的分离

内皮细胞在调节血管张力、免疫力、凝血和通透性方面起着关键作用。内皮功能障碍发生在糖尿病、动脉粥样硬化、败血症和急性肺损伤等疾病中。需要一种可靠且可重复的方法来从小鼠中分离纯内皮细胞，以研究内皮细胞在这些和其他疾病的发病机制中的作用。在该方案中，从5-7日龄的新生小鼠幼崽制备肺微血管内皮细胞。收获肺，切碎并用胶原酶I酶消化，释放的细胞培养过夜。然后使用与磁珠偶联的抗PECAM1（CD-31）IgG选择内皮细胞，并再次培养细胞以汇合。然后进行二次细胞选择，将抗ICAM2（CD-102）IgG与磁珠偶联以提高内皮细胞的纯度，并再次培养细胞以汇合。整个过程大约需要7-10天才能将细胞用于实验。这种简单的方案产生高纯度（纯度>92%）的内皮细胞，可立即用于 体外 研究，包括专注于内皮细胞因子和趋化因子产生、白细胞-内皮相互作用、内皮凝血途径和内皮通透性的研究。由于有许多敲除和转基因小鼠系可用，该程序还有助于了解内皮细胞在对损伤，感染和炎症的健康和病理反应中表达的特定基因的功能。