Funktionell bedömning av kinesin-7 CENP-E i spermatocyter med användning av in vivo-hämning, immunofluorescens och flödescytometri

I eukaryoter är meios avgörande för genomstabilitet och genetisk mångfald vid sexuell reproduktion. Experimentella analyser av spermatocyter i testiklar är kritiska för undersökningar av spindelsammansättning och kromosomsegregering vid manlig meiotisk delning. Musspermatocyten är en idealisk modell för mekanistiska studier av meios, men effektiva metoder för analys av spermatocyter saknas. I denna artikel rapporteras en praktisk och effektiv metod för in vivo-hämning av kinesin-7 CENP-E i musspermatocyter. Ett detaljerat förfarande för testikelinjektion av en specifik hämmare GSK923295 genom bukkirurgi hos 3 veckor gamla möss presenteras. Vidare beskrivs här en serie protokoll för vävnadsinsamling och fixering, hematoxylin-eosinfärgning, immunofluorescens, flödescytometri och transmissionselektronmikroskopi. Här presenterar vi en in vivo-hämningsmodell via bukkirurgi och testikelinjektion, som kan vara en kraftfull teknik för att studera manlig meios. Vi visar också att CENP-E-hämning resulterar i kromosomfelinriktning och metafasstopp i primära spermatocyter under meios I. Vår in vivo-hämningsmetod kommer att underlätta meiosstudier, fungera som en användbar metod för genetiska modifieringar av manliga könslinjer och belysa framtida kliniska tillämpningar.