Subkultur och kryokonservering av esofagusadenokarcinomorganoider: Fördelar och nackdelar för encellsförtunning

Bristen på lämpliga translationella forskningsmodeller som återspeglar primär sjukdom för att utforska tumorigenes och terapeutiska strategier är ett stort hinder i matstrupen adenokarcinom (EAC). Patient-härledda organoider (PDO) har nyligen framträtt som en anmärkningsvärd preklinisk modell i en mängd olika cancerformer. Det finns dock fortfarande begränsade protokoll tillgängliga för att utveckla EAC PDOs. När underofficerarna har fastställts är förökning och kryokonservering avgörande för ytterligare analyser nedströms. Här har två olika metoder standardiserats för EAC PDOs subkultur och kryokonservering, dvs med och utan encellsförtunning. Båda metoderna kan på ett tillförlitligt sätt erhålla lämplig cellviabilitet och är tillämpliga för en mångsidig experimentell inställning. Den aktuella studien visade att subkulturerande EAC-SUB med encellsförtunning är lämplig för de flesta experiment som kräver cellnummerkontroll, enhetlig densitet och en ihålig struktur som underlättar storleksspårning. Den enda cellbaserade metoden visar dock långsammare tillväxt i odling såväl som efter återodling från frysta lager. Dessutom kännetecknas subkulturering med encellsförtunning genom att bilda ihåliga strukturer med en ihålig kärna. Däremot är bearbetning av EAC-SUB utan encellsförtunning gynnsam för kryokonservering, expansion och histologisk karakterisering. I detta protokoll beskrivs fördelarna och nackdelarna med subkulturering och kryokonservering av EAC-SUB med och utan encellsförtunning för att göra det möjligt för forskare att välja en lämplig metod för att bearbeta och undersöka sina organoider.