Incapsulamento rapido del citoscheletro ricostituito all'interno di vescicole unilamellari giganti

Le vescicole unilamellari giganti (GUV) sono spesso utilizzate come modelli di membrane biologiche e quindi sono un ottimo strumento per studiare i processi cellulari correlati alla membrana in vitro. Negli ultimi anni, l'incapsulamento all'interno dei GUV ha dimostrato di essere un approccio utile per esperimenti di ricostituzione in biologia cellulare e campi correlati. Imita meglio le condizioni di confinamento all'interno delle cellule viventi, al contrario della ricostituzione biochimica convenzionale. I metodi per l'incapsulamento all'interno dei GUV spesso non sono facili da implementare e le percentuali di successo possono differire significativamente da laboratorio a laboratorio. Una tecnica che ha dimostrato di avere successo nell'incapsulare sistemi proteici più complessi è chiamata incapsulamento continuo dell'interfaccia goccioline che attraversa l'incapsulamento (cDICE). Qui, viene presentato un metodo basato su cDICE per incapsulare rapidamente proteine citoscheletriche in GUV con elevata efficienza di incapsulamento. In questo metodo, in primo luogo, le goccioline lipidiche-monostrato vengono generate emulsionando una soluzione proteica di interesse in una miscela lipidico/oleosa. Dopo essere state aggiunte in una camera rotante stampata in 3D, queste goccioline lipidiche-monostrato passano quindi attraverso un secondo monostrato lipidico in un'interfaccia acqua / olio all'interno della camera per formare GUV che contengono il sistema proteico. Questo metodo semplifica la procedura generale di incapsulamento all'interno dei GUV e accelera il processo, e quindi ci consente di confinare e osservare l'evoluzione dinamica dell'assemblaggio della rete all'interno di vescicole lipidiche a doppio strato. Questa piattaforma è utile per studiare la meccanica delle interazioni citoscheletro-membrana nel confinamento.