使用秀丽隐杆线虫中的自动包涵体计数监测体内蛋白质聚集动力学

蛋白质聚集成不溶性内含物是多种人类疾病的标志，其中许多疾病与年龄有关。线虫 秀丽隐杆线虫 是一种成熟的模式生物，已在该领域被广泛用于研究蛋白质聚集和毒性。其光学透明度能够通过荧光显微镜直接可视化蛋白质聚集。此外，快速的繁殖周期和较短的寿命使线虫成为筛选调节这一过程的基因和分子的合适模型。

然而，活体动物中聚集负荷的定量标准化较差，通常通过在荧光解剖显微镜下在单个时间点手动计数来进行包涵体计数。这种方法可能导致观察者之间的高度可变性，并限制对聚合过程的理解。相反，淀粉样蛋白样蛋白 在体外 聚集通过硫黄素T荧光以高度定量和时间分辨的方式常规监测。

在这里，提出了一种类似的方法，用于活 秀丽隐杆线虫聚集动力学的无偏分析，使用高通量共聚焦显微镜结合定制的图像分析和数据拟合。该方法的适用性通过监测体壁肌肉细胞中荧光标记的聚谷氨酰胺（polyQ）蛋白的包涵体形成来证明。图像分析工作流程允许确定不同时间点的内含物数量，这些夹杂物拟合到基于单个肌肉细胞中独立成核事件的数学模型中。这里描述的方法可能被证明有助于以稳健和定量的方式评估蛋白质平衡因子和潜在治疗活体动物蛋白质聚集疾病的影响。