通过TIRF显微镜 在体外 同时可视化交联和单微管的动力学

微管是αβ-微管蛋白异源二聚体的聚合物，在细胞中组织成不同的结构。基于微管的架构和网络通常包含动态属性不同的微管阵列子集。例如，在分裂细胞中，稳定的交联微管束与动态非交联微管紧密共存。基于TIRF显微镜 的体外 重建研究能够同时可视化这些不同微管阵列的动力学。在该测定中，成像室与表面固定的微管组装在一起，这些微管要么以单丝形式存在，要么组织成交联束。微管蛋白、核苷酸和蛋白质调节剂的引入允许直接可视化相关蛋白质以及单个和交联微管的动态特性。此外，可以实时监测动态单个微管组织成束时发生的变化。这里描述的方法允许系统地评估单个蛋白质的活性和定位，以及在相同的实验条件下蛋白质调节剂对两个不同微管子集的协同作用，从而提供其他方法无法获得的机制见解。