डीएनए फाइबर परख का उपयोग कर मानव कोशिकाओं में पोस्ट-प्रतिकृति अंतराल संचय और मरम्मत का पता लगाना

डीएनए फाइबर परख मानव कोशिकाओं में डीएनए संश्लेषण के दौरान शामिल न्यूक्लियोटाइड एनालॉग्स के इम्यूनोडिटेक्शन के आधार पर प्रतिकृति कांटा गतिशीलता के विश्लेषण के लिए एक सरल और मजबूत तरीका है। हालांकि, इस तकनीक में कुछ हजार किलोबेस का सीमित रिज़ॉल्यूशन है। नतीजतन, पोस्ट-प्रतिकृति एकल-फंसे डीएनए (एसएसडीएनए) अंतराल के रूप में कुछ सौ ठिकानों के रूप में छोटे मानक परख द्वारा पता लगाने योग्य नहीं हैं। यहां, हम डीएनए फाइबर परख के एक संशोधित संस्करण का वर्णन करते हैं जो एस 1 न्यूक्लियस का उपयोग करता है, एक एंजाइम जो विशेष रूप से एसएसडीएनए को क्लीव करता है। पोस्ट-प्रतिकृति एसएसडीएनए अंतराल की उपस्थिति में, एस 1 न्यूक्लियस अंतराल को लक्षित और क्लीव करेगा, जिससे छोटे ट्रैक्ट उत्पन्न होंगे जिन्हें चल रहे कांटे पर एसएसडीएनए अंतराल के लिए रीड-आउट के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। ये पोस्ट-प्रतिकृति एसएसडीएनए अंतराल तब बनते हैं जब क्षतिग्रस्त डीएनए को असंतत रूप से दोहराया जाता है। उन्हें जीनोम प्रतिकृति से असंबद्ध तंत्र के माध्यम से मरम्मत की जा सकती है, एक प्रक्रिया में जिसे गैप-फिलिंग या पोस्ट-रेप्लिकेटिव मरम्मत के रूप में जाना जाता है। क्योंकि गैप-फिलिंग तंत्र में एस चरण से स्वतंत्र डीएनए संश्लेषण शामिल है, डीएनए फाइबर लेबलिंग योजना में परिवर्तन को गैप-फिलिंग घटनाओं की निगरानी के लिए भी नियोजित किया जा सकता है। कुल मिलाकर, डीएनए फाइबर परख के ये संशोधन यह समझने के लिए शक्तिशाली रणनीतियां हैं कि मानव कोशिकाओं के जीनोम में पोस्ट-प्रतिकृति अंतराल कैसे बनते हैं और भरे जाते हैं।