En in vitro-tilgang til undersøgelse af mitokondriel dysfunktion: En cybridmodel

Mangel på mitokondrielle respiratoriske kædekomplekser, der udfører oxidativ phosphorylering (OXPHOS), er den biokemiske markør for humane mitokondrielle lidelser. Fra et genetisk synspunkt repræsenterer OXPHOS et unikt eksempel, fordi det skyldes komplementering af to forskellige genetiske systemer: nukleart DNA (nDNA) og mitokondrie-DNA (mtDNA). Derfor kan OXPHOS-defekter skyldes mutationer, der påvirker nukleare og mitokondrielle kodede gener.

Det banebrydende arbejde af King og Attardi, der blev offentliggjort i 1989, viste, at menneskelige cellelinjer udtømt for mtDNA (kaldet rho⁰) kunne genbefolkes af eksogene mitokondrier for at opnå de såkaldte "transmitokondrielle cybrider". Takket være disse cybrider, der indeholder mitokondrier afledt af patienter med mitokondrielle lidelser (MD'er) og kerner fra rho^0-celler , er det muligt at kontrollere, om en defekt er mtDNA- eller nDNA-relateret. Disse cybrider er også et kraftfuldt værktøj til at validere patogeniciteten af en mutation og studere dens indvirkning på et biokemisk niveau. Dette papir præsenterer en detaljeret protokol, der beskriver cybridgenerering, udvælgelse og karakterisering.