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Abstract
Biology
La microscopie électronique à transmission a longtemps été considérée comme la référence en matière de visualisation de l’ultrastructure cellulaire. Cependant, l’analyse est souvent limitée à deux dimensions, ce qui entrave la capacité de décrire pleinement l’ultrastructure tridimensionnelle (3D) et la relation fonctionnelle entre les organites. La microscopie électronique volumique (vEM) décrit un ensemble de techniques qui permettent l’interrogation de l’ultrastructure cellulaire en 3D à des résolutions à méso-échelle, micro-échelle et nanométrique.
Ce protocole fournit une méthode accessible et robuste pour acquérir des données vEM à l’aide de la transmission de section série EM (TEM) et couvre les aspects techniques du traitement des échantillons jusqu’à la reconstruction 3D numérique dans un flux de travail unique et simple. Pour démontrer l’utilité de cette technique, la relation ultrastructurale 3D entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries et leurs sites de contact dans les hépatocytes hépatiques est présentée. Les contacts interorganelles jouent un rôle essentiel dans le transfert d’ions, de lipides, de nutriments et d’autres petites molécules entre les organites. Cependant, malgré leur découverte initiale dans les hépatocytes, il reste encore beaucoup à apprendre sur leurs caractéristiques physiques, leur dynamique et leurs fonctions.
Les contacts interorganelles peuvent afficher une gamme de morphologies, variant dans la proximité des deux organites l’un à l’autre (généralement ~ 10-30 nm) et l’étendue du site de contact (des contacts ponctués aux contacts cisternels 3D plus grands). L’examen des contacts étroits nécessite une imagerie à haute résolution, et la section série TEM est bien adaptée pour visualiser l’ultrastructure 3D des contacts interorganelles lors de la différenciation des hépatocytes, ainsi que les altérations de l’architecture des hépatocytes associées aux maladies métaboliques.
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