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Abstract
Biology
Die Transmissionselektronenmikroskopie gilt seit langem als Goldstandard fĂŒr die Visualisierung zellulĂ€rer Ultrastrukturen. Die Analyse ist jedoch oft auf zwei Dimensionen beschrĂ€nkt, was die FĂ€higkeit behindert, die dreidimensionale (3D) Ultrastruktur und die funktionelle Beziehung zwischen Organellen vollstĂ€ndig zu beschreiben. Die Volumenelektronenmikroskopie (vEM) beschreibt eine Sammlung von Techniken, die die Abfrage der zellulĂ€ren Ultrastruktur in 3D bei mesoskaligen, mikroskaligen und nanoskaligen Auflösungen ermöglichen.
Dieses Protokoll bietet eine zugĂ€ngliche und robuste Methode zur Erfassung von vEM-Daten mittels serieller SchnittĂŒbertragung EM (TEM) und deckt die technischen Aspekte der Probenbearbeitung bis hin zur digitalen 3D-Rekonstruktion in einem einzigen, unkomplizierten Workflow ab. Um die NĂŒtzlichkeit dieser Technik zu demonstrieren, wird die ultrastrukturelle 3D-Beziehung zwischen dem endoplasmatischen Retikulum und den Mitochondrien und ihren Kontaktstellen in Leberhepatozyten vorgestellt. Interorganelle Kontakte spielen eine wichtige Rolle bei der Ăbertragung von Ionen, Lipiden, NĂ€hrstoffen und anderen kleinen MolekĂŒlen zwischen Organellen. Trotz ihrer ersten Entdeckung in Hepatozyten gibt es jedoch noch viel ĂŒber ihre physikalischen Eigenschaften, Dynamik und Funktionen zu lernen.
Interorganellenkontakte können eine Reihe von Morphologien aufweisen, die sich in der NĂ€he der beiden Organellen zueinander (typischerweise ~ 10-30 nm) und der Ausdehnung der Kontaktstelle (von punktuellen Kontakten bis zu gröĂeren 3D-zisternenartigen Kontakten) unterscheiden. Die Untersuchung enger Kontakte erfordert eine hochauflösende Bildgebung, und der serielle Schnitt TEM eignet sich gut, um die ultrastrukturelle 3D-Struktur von interorganellen Kontakten wĂ€hrend der Hepatozytendifferenzierung sowie VerĂ€nderungen in der Hepatozytenarchitektur im Zusammenhang mit Stoffwechselerkrankungen zu visualisieren.
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