Caracterização tridimensional de Sítios de Contato Interorganelle em Hepatócitos usando Microscopia eletrônica de seção serial

A microscopia eletrônica de transmissão tem sido considerada por muito tempo o padrão-ouro para a visualização da ultraestrutura celular. No entanto, a análise é muitas vezes limitada a duas dimensões, dificultando a capacidade de descrever totalmente a ultraestrutura tridimensional (3D) e a relação funcional entre organelas. A microscopia eletrônica de volume (vEM) descreve uma coleção de técnicas que permitem o interrogatório da ultraestrutura celular em 3D em resoluções de mesoescala, microescala e nanoescala.

Este protocolo fornece um método acessível e robusto para adquirir dados vEM usando a transmissão de seção serial EM (TEM) e abrange os aspectos técnicos do processamento de amostras até a reconstrução 3D digital em um único e simples fluxo de trabalho. Para demonstrar a utilidade dessa técnica, apresenta-se a relação ultraestrutural 3D entre o regúrio endoplasmático e mitocôndrias e seus locais de contato em hepatócitos hepáticos. Os contatos interorganelle servem papéis vitais na transferência de íons, lipídios, nutrientes e outras pequenas moléculas entre organelas. No entanto, apesar de sua descoberta inicial em hepatócitos, ainda há muito a aprender sobre suas características físicas, dinâmicas e funções.

Os contatos de Interorganelle podem exibir uma gama de morfologias, variando na proximidade das duas organelas umas com as outras (tipicamente ~10-30 nm) e a extensão do local de contato (de contatos pontuados a contatos cisternas maiores). O exame de contatos próximos requer imagens de alta resolução, e a seção serial TEM é adequada para visualizar a ultraestruturação 3D de contatos interorganelle durante a diferenciação de hepatócitos, bem como alterações na arquitetura hepatócito associada a doenças metabólicas.