מודל מכרסמים משופר של איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה

Summary

מודל איסכמיה-רפרפוזיה שריר הלב של לב חולדה משופר על ידי שימוש ב- retractor מתוצרת עצמית, צינור פוליוויניל כלוריד ושיטת קשר ייחודית. אלקטרוקרדיוגרמה, טריפנילטרזוליום כלוריד וכתמים היסטולוגיים, ותוצאות ניתוח הישרדות באחוזים הראו כי לקבוצת המודל המשופרת יש שיעורי הצלחה והישרדות גבוהים יותר מאשר לקבוצת המודל הקיימת כבר.

Abstract

איסכמיה שריר הלב ופגיעה ברפרפוזיה (MIRI), המושרה על ידי מחלת לב כלילית (CHD), גורמת נזק לקרדיומיוציטים. יתר על כן, עדויות מצביעות על כך שטיפול טרומבוליטי או התערבות כלילית מלעורית ראשונית (PPCI) אינם מונעים פגיעה ברפרפוזיה. עדיין אין מודל חייתי אידיאלי עבור MIRI. מחקר זה נועד לשפר את מודל MIRI בחולדות כדי להפוך את הניתוח לקל יותר ובר ביצועי יותר. שיטה ייחודית להקמת MIRI מפותחת על ידי שימוש בצינור רך במהלך שלב מפתח של התקופה האיסכמית. כדי לחקור את השיטה הזו, שלושים חולדות חולקו באופן אקראי לשלוש קבוצות: קבוצת שאם (n = 10); קבוצת מודל ניסיוני (n = 10); וקבוצת מודל קיימת (n = 10). ממצאים של צביעת טריפנילטרזוליום כלוריד, אלקטרוקרדיוגרפיה ואחוז הישרדות מושווים כדי לקבוע את הדיוקים ושיעורי ההישרדות של הניתוחים. בהתבסס על תוצאות המחקר, הוסק כי שיטת הניתוח המשופרת קשורה לשיעור הישרדות גבוה יותר, מקטע ST-T גבוה יותר וגודל אוטם גדול יותר, אשר צפוי לחקות את הפתולוגיה של MIRI טוב יותר.

Introduction

מחלות לב איסכמיות הן הגורם המוביל לתמותה ברחבי העולם. לתמותה קרדיווסקולרית יש תפקיד מכריע בבריאות הציבור ובאפידמיולוגיה ברחבי העולם¹. איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה ממלאים תפקידים חיוניים במחלת לב איסכמית, המתייחסת לתהליך פתופיזיולוגי מורכב הכולל דלדול של אדנוזין טריפוספט², ייצור מופרז של מיני חמצן תגובתי³, תגובות דלקתיות⁴, ותפקוד לקוי של המיטוכונדריה עקב עומס יתר של סידן⁵, המפעיל אוטם שריר הלב חריף באמצעות תפקוד מטבולי ונזק מבני⁶.

עם זאת, המנגנונים המפורטים העומדים בבסיס איסכמיה שריר הלב ופציעת רפרפוזיה (MIRI) עדיין אינם ידועים. העבודה הנוכחית נועדה לפתח מודל חייתי ייחודי המדמה כראוי את ההצגה הקלינית והטיפול ב-MIRI. אחרת, בתהליך של מחקר מודל MIRI, בעלי חיים גדולים⁷ (כגון חזירים) דורשים ניתוח התערבותי, וזה יקר. בעלי חיים קטנים (כגון ארנבות⁸, עכברים 9,10,11,12 וחולדות ¹³) זקוקים לניתוח עדין תחת מיקרוסקופיה¹⁰, שקים נשלטים מרחוק ^8,11, או סחיטת הלב מתוך חלל 9, ^הדורשת רמה גבוהה של טכנולוגיה ועלולה לגרום למספר סיבוכים לאחר הניתוח המפריעים לדיוק הממצאים. מודל MIRI אידיאלי עם שיעור הישרדות גבוה יותר ועלות נמוכה יותר ימלא תפקיד מכריע במחקר פתולוגי.

מחקר זה נועד להילחם בסוגיות אלה על ידי הקמת מודל נגיש וישים יותר של MIRI בחולדות כדי להקל על המחקר על הפתולוגיה של MIRI, אשר יכול להוביל לגילוי של טיפולים קליניים עבור MIRI.

Protocol

המחקר אושר על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת נאנג'ינג לרפואה סינית (אישור מס ' 202004A002). המחקר פעל בקפדנות על פי הנחיות המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) בנוגע לשימוש בחיות מעבדה (פרסום NIH מס '85-23, מתוקן 2011). שלושים חולדות ספראג-דאולי זכרות (משקל, 300 ± 50 גרם; גיל, 12 ± 14 שבועות) שימשו בעבודה זו.

1. הכנת בעלי חיים

1. יש לשלול מהחולדות מזון ומים למשך 12 שעות לפני הניתוח. צום טרום ניתוחי נועד למנוע שאיפה ריאתית¹⁴.
2. לעקר את כל המכשירים לפני הניתוח באמצעות מעקר קיטור בלחץ גבוה.
3. מרדימים את החולדות על ידי מתן נתרן פנטוברביטלי (1.5%, 75 מ"ג/ק"ג) באמצעות הזרקה תוך-צפקית (ראו טבלת חומרים).
4. להעריך את היעילות של הרדמה על ידי ביצוע בדיקת בוהן צביטה.
   הערה: החולדה נחשבת מורדמת מספיק אם לא נצפו רפלקסים כאשר כף ידה האחורית מוחזקת על ידי הפינצטה.
5. יישרו את החלק האמצעי של שני מהדקי נייר כדי ליצור צורת "S". משוך מטה את החלק הרחב של כל "S" כדי ליצור נסוג קטן.
6. חותכים צינור פוליוויניל כלוריד בקוטר 2 מ"מ (PVC) לחתיכות באורך 7 מ"מ. הכנס תפר באורך 10 ס"מ 4-0 לתוך צינור PVC, וקשר את קצוותיו.
7. ליגט את העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD) ואת צינור ה- PVC יחד באמצעות תפר 6-0. חותכים חריץ באמצע צינור ה-PVC באמצעות מספריים אופתלמיים, ומשתמשים בחריץ כדי להשחיל את התפר 6-0 דרך הצינור כדי למנוע ממנו ליפול.
   הערה: צינור ה-PVC ומחזירי הצורה "S" מוצגים באיור משלים 1.

2. הליך ניתוח

1. בצע ניתוח כדי ליצור את מודל חולדות MIRI המשופר בהתאם לשלבים הבאים.
   הערה: קבוצת מודל בעלי החיים שנוצרה על ידי שיטת MIRI המשופרת מכונה קבוצת המודל הניסויי לאורך כל המאמר.
   1. לאחר ההרדמה (שלב 1.2), לתקן את הגפיים של החולדה עם סרט על ידי הנחת החולדה על הלוח הכירורגי במצב שכיבה. גילחו את הצוואר ואת אזור החזה הקדמי עם קרם דפילטורי, ונקו את העור עם 75% אלכוהול וקרצוף יודופור.
   2. חותכים את עור הצוואר לאורך הקו הצווארי החציוני באמצעות מספריים אופתלמיים.
   3. הפרד את שרירי הצוואר באמצעות פינצטה אופתלמית, והנח נסיגה (שלב 1.4) בכל צד כדי לסגת מהם עוד יותר.
      הערה: יש צורך לחשוף את קנה הנשימה כראוי, שכן הוא קריטי למניעת דימום מבלוטת התריס במהלך שלב זה.
   4. לאחר חשיפת קנה הנשימה, זהה את הרווח בין טבעות קנה הנשימה הרביעי והחמישי. מרחב זה הוא נקודת הניקוב.
   5. סמן נקודה זו באמצעות הקצה הקהה של קצה מחט. בצע חתך של 3 מ"מ במקביל לסחוס הקריקואידי בנקודה זו.
   6. הכניסו טרוקר יניקה (ראו טבלת חומרים) לקנה הנשימה דרך החתך (שלב 2.1.5), ואוורור מכני של החולדה כדי לשמור על נשימה תקינה בקצב של 80 נשימות לדקה ונפח גאות של 8 מ"ל/ק"ג.
   7. לאחר מכן, בצע חתך של 4-5 ס"מ מה-xiphoid לאמצע החלל האינטרקוסטלי השמאלי השני תוך החזקת האזמל בזווית של 45°. בעדינות ובאיטיות, הפרידו את השרירים הקדמיים של פקטורליס מז'ור וסראטוס באמצעות פינצטה אופטלמית כדי לגשת לחלל הבין-כוכבי.
   8. בצע חתך של 1.5 ס"מ באופן רוחבי בין הצלעות השלישית והרביעית השמאלית באמצעות מספריים עיניים.
   9. במידת הצורך, חתכו את הצלע הרביעית כדי לחשוף את הלב המכוסה על ידי הריאה השמאלית. זה נותן נראות טובה יותר.
   10. כדי למנוע פציעות, מניחים כדורי צמר גפן ספוגים בתמיסת המלח הפיזיולוגית מעל הריאות בחלל בית החזה. לנתח את קרום הלב באמצעות פינצטה אופטלמית, להרים את תוספת הפרוזדורים השמאלית על ידי פינצטה, ולזהות את האוסטיום הכלילי הנמצא בשורש עורק אבי העורקים.
   11. בקטע שבין הריאה השמאלית לאוריקל, ליגט את ה-LAD ואת הצינור הקצר שהוכן מראש (שלב 1.6) יחד באמצעות תפר כירורגי 6-0, ולקשור אותו באמצעות תפר החלקה. מניחים את ה-slipknot בחריץ של צינור ה-PVC, ומהדקים את הצינור הקשור ואת ה-LAD באמצעות החלקה שנייה למשך 45 דקות^ו-15 (איור 1A,B).
   12. תעד את שינוי הצבע בחלק הקדמי של החדר השמאלי ואת גובה מקטע ST באלקטרוקרדיוגרמה (א.ק.ג.) במהלך תקופת האיסכמיה.
       הערה: החלק הקדמי של החדר השמאלי הופך חיוור בתקופת האיסכמיה.
   13. הידקו את שרירי החזה והעור באמצעות קליפס עורק, וכסו את הפצע בגאזה מלוחה לחה.
   14. שחררו את ה-slipknot, והסירו את הצינור הקצר שהוכן מראש לאחר 45 דקות^ו-15 (איור 1C).
   15. יש לשמור על החולדות מורדמות במהלך רפרפוזיה במשך שעתיים.
2. בצע ניתוח ליצירת מודל החולדה בעקבות הליך¹⁶ שפורסם בעבר.
   הערה: קבוצת מודלים זו של בעלי חיים מכונה קבוצת המודל הקיימת לאורך כל המאמר.
   1. לפני קשירת העורק הכלילי LAD, בצע את אותם צעדים כמו קבוצת המודל הניסויי.
   2. במהלך התקופה האיסכמית, ליגט את העורק הכלילי הפרוקסימלי LAD של כל חולדה עם סלימקנוט רק באמצעות תפר כירורגי 6-0 באותה תנוחה כמו קבוצת המודל הניסויי ולקשור את החלקה למשך 45 דקות.
   3. לאחר הקשירה, שחררו את ההחלקה עם פינצטה, תפרו את החתכים של החולדה עם מחט תפר ופינצטה, והשאירו את החיה בהרדמה עמוקה של 1.5% נתרן פנטוברביטלי לאורך כל תקופת הרפרפוזיה 17,18,19 למשך שעתיים לפני קצירת לבבות החולדה.

3. הערכה של צביעת טריפנילטרזוליום כלוריד

1. בסוף הרפרפוזיה, החולדות מורדמות תוך שהן עדיין מורדמות עמוקות. להקריב את החולדות ולקצור את ליבם^16,20 מיד. שטפו את הלבבות בתמיסת PBS, ואחסנו אותם בטמפרטורה של −20 מעלות צלזיוס למשך כ-20 דקות כדי להקשיח את הרקמות.
2. לאחר מכן, חתכו את הלבבות לפרוסות של 2 מ"מ עם להב מיקרוטום, דגירו אותם עם 2% triphenyltetrazolium chloride (TTC) (ראו טבלת חומרים) בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך כ-30 דקות, ותיקנו אותם בפורמלין נייטרלי ב-10%.
3. צלם את פרוסות הלב, וחשב את אזורי האוטם באמצעות תוכנת עיבוד תמונה של תוכנת ImageJ (ראה טבלת חומרים).
   הערה: בשל הכתם, אתרי האוטם נראים לבנים בהירים, בעוד שרקמות רגילות נראות אדומות כהות.

4. צביעה היסטולוגית

1. לקצור את הלבבות בהרדמה עמוקה של 1.5% נתרן פנטוברביטלי בסוף תקופת הרפרפוזיה.
2. תקן את הלבבות ב 10% פורמלין ב 4 ° C במשך 48 שעות.
3. לאחר מכן, חתכו את הלבבות במיקרוטום ל-6 פרוסות לפחות (בעובי 5 מיקרומטר) והבטיחו לפחות שלוש פרוסות להמטוקסילין ואוזין (H&E) ומאסון להכתים^20,21.
4. צפו במגלשות תחת מיקרוסקופ אור, וצלמו אותן.

5. הערכת א.ק.ג.

1. חלקו באופן אקראי את בעלי החיים לקבוצות מודלים ניסיוניות או קיימות של MIRI או לקבוצות שיימינג כדי להעריך את השינויים באק"ג.
2. מרדימים את כל החולדות במהלך הקשירות הכירורגיות ומעריכים את העופרת הסטנדרטית של הגפיים II במעקב אחר^20,21 כדי לזהות שינויים באק"ג ולאשר איסכמיה שריר הלב.
3. אחסן את כל התמונות בספריה דיגיטלית.

6. ניתוח סטטיסטי

1. בצע ניתוחים סטטיסטיים באמצעות תוכנות גרפים מדעיות וסטטיסטיקה (ראה טבלת חומרים).
2. להביע את כל הנתונים כממוצע ± שגיאת תקן של הממוצע. לאחר מבחני נורמליות ולוגי-נורמליות של כל קבוצה, בצע ניתוח חד-כיווני של שונות ומבחני t²² כדי לקבוע הבדלים משמעותיים בין הקבוצות. שקול ערך p <0.05 כמובהק סטטיסטית.

תוצאות

צביעת TTC
מקטעי לב של חולדות שעברו את הליך MIRI הקיים או המשופר או ניתוח הבושה הוכתמו ב-TTC, והתמונות אוחסנו באופן דיגיטלי ונותחו באמצעות ImageJ. חולדות שעברו את נהלי MIRI שכבר היו קיימים או משופרים סבלו מאוטם שריר הלב, בעוד שחולדות מקבוצת ה-sham לא עשו זאת (איור 2B). בהשוואה לחולדות בקבוצת ה-sham, לחולדות בקבוצות המודל הקיימות (p < 0.0001) ובניסוי (p < 0.0001) בקבוצות המודל של MIRI היה הבדל משמעותי בגודל האוטם שריר הלב, ולקבוצת המודל הניסויית היה גודל אוטם שריר הלב גדול יותר מאשר לקבוצת המודל הקיימת (p = 0.0176) (איור 3B).

כתמים היסטולוגיים
ניתוח של דגימות שהוכתמו באמצעות כתמי H&E ו-Masson^22,23 הראה כי בהשוואה לקבוצת ה-sham, הקרדיומיוציטים הן של קבוצת הניסוי והן של קבוצות המודל הקיימות חוו נזק קריטי ונוקליאוליזה והסתננו על ידי נויטרופילים רבים (איור 3).

בדיקת א.ק.ג.
מקטעי האק"ג ST-T של חולדות בקבוצות המודל הקיימות והניסיוניות של MIRI היו גבוהים בהשוואה לאלה של חולדות בקבוצת ה-sham (איור 4A), וההבדלים בין המודל הניסיוני לבין קבוצות ה-sham (p < 0.0001) או בין המודל הקיים לבין קבוצות ה-sham (עמ' < 0.0001) היו משמעותיים (איור 4B). יתר על כן, מקטע ST-T היה גבוה יותר בקבוצת המודל הניסיוני מאשר בקבוצת המודל הקיימת (p = 0.0274) (איור 4C).

אחוזי הישרדות
שיעור ההישרדות היה שונה באופן משמעותי בין שתי קבוצות המודל של MIRI (איור 4D). ארבע מתוך עשר החולדות מתו בקבוצת המודל הקיימת. שיעור התמותה היה 40% בתקופת הרפרפוזיה. לעומת זאת, אף אחת מהחולדות בקבוצת המודל הניסויי לא מתה במהלך הניתוח, מה שמדגים כי למודל המשופר הנוכחי היה שיעור הישרדות גבוה יותר (p = 0.0291).

איור 1: שלבים מרכזיים בניתוח המודל של איסכמיות בשריר הלב ופציעת רפרפוזיה (MIRI). נקודות ירוקות מציינות את פרוטוקול הליגטורה בתקופה האיסכמית, כולל הנחת הצינור הרך על העורקים הכליליים (A), חיבור קו התפר לחריץ של הצינור הרך שהוכן מראש (B), שחרור ההחלקה והסרת הצינור הרך עם תחילת תקופת הרפרפוזיה (סרגל קנה מידה = 1 ס"מ) (C ). LAA: תוספת פרוזדורים שמאליים, RAA: תוספת פרוזדורים ימנית, LAD: עורק קדמי שמאלי יורד, RCA: עורק כלילי ימני, IVC: Vena Cava נחות, SVC: קאווה ורידים עליונים, AO: עורק אבי העורקים, PA: עורק ריאתי. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

איור 2: כל הליך הניתוח וההבדלים בכתמי טריפנילטרזוליום כלוריד (TTC) בין קבוצות שונות. המחזיר הקטן שהוכן מראש (סרגל קנה מידה = 15 מ"מ), צינור רך (סרגל קנה מידה = 10 מ"מ), והניתוח כולו (סרגל קנה מידה = 15 מ"מ) מוצגים (A). שלושים חולדות חולקו באופן אקראי לקבוצות הניסוי (n = 10), קבוצת sham (n = 10) והמודל הקיים (n = 10). צביעת TTC הצביעה על כך שגם בקבוצות הניסוי וגם בקבוצות המודלים הקיימות היו שינויים משמעותיים בהשוואה לקבוצת ה-sham (B). הדופן הקדמית של שריר הלב בניסוי והדופן הצדדית בקבוצות המודל הקיימות הפכו ללבן חיוור, ואישרו את מיקומו של האזור האיסכמי (סרגל קנה מידה = 5 מ"מ). "המודל הקיים" מתואר כ"מודל הישן" באיור. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

איור 3: הבדלים בכתמי H&E ו-Masson בין קבוצות. שלושים חולדות ספראג דאולי זכריות חולקו באופן אקראי לקבוצות הניסוי (n = 10), קבוצת sham (n = 10) והמודל הקיים (n = 10), וההשוואה בין השינויים המורפולוגיים בתאים בין קבוצות מוצגת (סרגל קנה מידה = 2 מ"מ). המטוקסילין ואוסין (H&E) וצביעת מאסון מראים כי לתאי שריר הלב של המודל הניסיוני ולקבוצות המודל הקיימות יש נזק קריטי, נוקליאוליזה, והם מסתננים על ידי נויטרופילים רבים בהשוואה לאלה של קבוצת ה-sham (סרגל קנה מידה = 100 מיקרומטר). "המודל הקיים" מתואר כ"מודל הישן" באיור. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

תרשים 4: הבדלים בתוצאות סטטיסטיות בין קבוצות. שלושים חולדות ספראג דאולי זכריות חולקו באופן אקראי לקבוצות הניסוי (n = 10), קבוצת sham (n = 10) והמודל הקיים (n = 10). ממצאי אלקטרוקרדיוגרמה מראים כי בהשוואה לקבוצת המודלים הקיימת, לקבוצת המודל הניסויי יש גודל אוטם שריר הלב גדול יותר (****p < 0.0001, *p = 0.0176) (A), גובה מקטע ST גבוה יותר (****p < 0.0001, *p = 0.0274) (B) ואחוז הישרדות גבוה יותר (p = 0.0291) (C ). במיוחד, חולדות מקבוצת המודל הקיימת היו בסיכון גבוה יותר למות בתחילת תקופת האיסכמיה ובתחילת תקופת הרפרפוזיה (D). "המודל הקיים" מתואר כ"מודל הישן" באיור. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של נתון זה.

איור משלים 1: הפרטים של המחזיר המוכן מראש וצינור ה-PVC. מוצגות ה-retractor (A) המוכנות מראש וצינור ה-PVC (B). אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

Discussion

ההבדל העיקרי בין השיטות הקיימות כבר לבין השיטות המשופרות היה השימוש בצינורות PVC בתהליך ההצמדה. בשיטת הניתוח הקיימת, רקמת שריר הלב נקשרה באמצעות תפר משי 6-0 בלבד, מה שגרם נזק לשריר הלב במהלך קשירת וכתוצאה מכך למוות תוך ניתוחי. יתר על כן, הפעימה של הלב תשחרר את ההחלקה. לעומת זאת, בשיטה המשופרת עם צינור ה-PVC, ניתן היה להדק את ההחלקה שהונחה בחריץ של הצינור, ולהגדיל את שטח שריר הלב המושפע מהקשירה. יתרונות אלה נצפו במהלך ההליך הניסיוני ואושרו על ידי צביעת TTC וממצאי ההישרדות באחוזים.

השלב הקריטי של שיטת הניתוח המשופרת היה הנחת הצינור הרך על העורק הכלילי הפרוקסימלי LAD, מלווה בעצבים, כלי הלימפה ורקמת שריר הלב במהלך קשירת התקופה האיסכמית. צינור רך מוכן מראש זה יכול לשמש כרית המגנה על הרקמות ההיקפיות (עצבים, מיוקרדיה וכלי הלימפה) ומפחיתה את התמותה במהלך קשירת עורקים כליליים. הניתוח שבוצע בשיטה הקיימת כבר היה דומה לניתוח לאוטם שריר הלב. ממצאי ההישרדות באחוזים הצביעו על כך שחולדות בקבוצת המודל הקיימת מתו בעיקר בתקופה האיסכמית (שתי חולדות מתו ב-2 דקות לאחר ההדבקה, ושתי חולדות מתו ב-45 דקות לאחר ההצמדה). אחרת, הסיבות הבסיסיות למוות עדיין אינן ברורות, וישנן שורה של השערות, כולל נזק נוסף למבני העצבים²³, כלי הלימפה והמיוקרדיה.

לגבי פגיעה עצבית, מחקרים קודמים הצביעו על כך שבמהלך התקופה האיסכמית במודל החי, מלבד ההשפעות המקומיות הישירות של איסכמיה על מבני העצבים, יש גם כנראה ירידה משמעותית ברמות הנוירופפטיד Y (NPY) התורמות להפרעות בהובלה אקסופלסמית בעצבנות הסימפתטית²⁴. ממצא זה מסכים עם התוצאות שדווחו על ידי Han et ^al.25, שגילו כי היעלמות הדרגתית של NPY התרחשה בתוך שריר הלב האוטם לאחר קשירת העורק הכלילי LAD בחולדות. עם זאת, תפקידו של NPY בהקשר זה עדיין אינו ברור. מחיקתו מחלישה תפקוד לקוי של הלב ואפופטוזיס במהלך אוטם שריר הלב^{החריף 26}, והיא קשורה להפרעת קצב²⁷, לחץ דם גבוה ותפקוד מיקרו-וסקולרי כלילי²⁸.

יתר על כן, חסימה שלילית של זרימת הלימפה הלבבית התרחשה במהלך התקופה האיסכמית, מה שהוביל לבצקת לב קשה, תפקוד לקוי שמאלי ודימומים²⁹, אשר עשויים להיות גורם נוסף למוות בחולדות. במהלך תהליך פתולוגי זה, ניתן לייחס את הליגטורה של העורק הכלילי LAD לחסימה של עורקים כליליים או הובלה לימפתית לבבית בתוך אזור האוטם, אשר יכול לגרום לסיבוכים נוספים, כגון שיפוץ שלילי של הלימפה של אספן אפיקרדיאלי, זרימת הלימפה מופחתת, ובצקת מתמשכת³⁰.

לכן, זרימת הדם בכלי הלימפה ממלאת תפקיד פונקציונלי בהומאוסטזיס לבבי³¹ ובריפוי^{פצעים 32}, וממצאי ההישרדות באחוזים במחקר זה מצביעים על כך שההליך הכירורגי המשופר של MIRI עשוי למנוע נזק לימפטי ולקדם רפרפוזיה לימפטית על ידי הנחת הצינור הרך על העורק הכלילי LAD במהלך הליגטורה. לשם השוואה, שיטת הניתוח הקיימת נוטה יותר לקרוע את שריר הלב ולגרום לדימום מסיבי במהלך קשירת העורק הכלילי LAD, ללא אפקט הריפוד של הצינור הרך. בנוסף, קוטר הצינור הרך שהוכן מראש היה גדול בהרבה מתופר המשי 6-0, וייתכן שהצינור התכווץ וגרם לגודל אוטם גדול יותר כאשר ההחלקה נקשרה לצינור במהלך התקופה האיסכמית.

למחקר זה היו כמה מגבלות. גודל האוטם של הלב נותח בניסוי הראשוני. נוסחת ההחלפה (N = 7.75) חושבה באמצעות משוואה³³ שדווחה בעבר. בהתחשב במוות אפשרי של חולדות במהלך הניתוח, N הועלה ב -25%; לפיכך, n = 10 (עשר חולדות לכל קבוצה) הוחלט. אחרת, בשיטה הקיימת כבר ליצירת מודל MIRI היה שיעור תמותה גבוה. לכן, מקרים מעטים (גודל מדגם נמוך) בקבוצת המודל הניסויי השפיעו על הממצאים הסטטיסטיים. מספר הערכות, כולל אקוקרדיוגרפיה³⁰, צביעה כחולה של אוונס³⁴ ומדידת אנזים שריר הלב³⁵, היו חיוניות להערכה ולניתוח של תפקוד הלב. בשל גודל המדגם הנמוך של עבודה זו, הערכות אלה לא בוצעו ויתואר במחקר עתידי של מחקר פרמקודינמי ב- MIRI. עם זאת, בהתחשב בכך שההליך הכירורגי הקיים ליצירת מודל MIRI קשור לנזק נרחב בשריר הלב, כדאי לדווח על שיטה נוכחית זו כדי לשפר את המידול של MIRI בחולדות ולהביא אור למודל פרה-קליני זה המדמה נכונה מחלת לב איסכמית.

לסיכום, לשיטת הניתוח המשופרת ליצירת מודל MIRI היה שיעור הישרדות גבוה יותר, סגמנט ST-T גבוה יותר וגודל אוטם גדול יותר משיטת יצירת מודל MIRI הקיימת, מה שמרמז על כך שהמודל המשופר מדמה טוב יותר את הפתולוגיה של MIRI.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% Neutral Formalin	Chunyu, China	_
2,3,5-Triphenyl-2H-Tetrazolium Chloride	Solarbio, China	T8107
75% Alchol	SCR, China	10009261
Artery Clip	Zhonglin Dongsheng, China	6.5cm
Camera	Olympus Corporation, Japan	EPL5
Cotton ball	Huachen, China	_
Dpilatory cream	Veet, China	_
Eye speculum	Shanghai Jingzhong, China	_
Gauze	Zhonggan, China	_
GraphPad	GraphPad Software, USA	8.0
H&E Kit	Solarbio, China	G1120
High-pressure steam sterilizer	TOMY, Japan	SX-500
ImageJ	NIH, USA	_
Masson Kit	Solarbio, China	G1340
Medical Tape	Mr.Song, China	_
Microscope	Olympus Corporation, Japan	CKX31
Microscopy	TEKSQRAY, China	_
Microtome	Leica, Germany	RM2235
Microtome Blade	Leica, Germany	819
Needle holder	Shanghai Jingzhong, China	_
Ophthalmic scissors	Shanghai Jingzhong, China	_
Ophthalmic tweezers	Shanghai Jingzhong, China	_
Paper clip	Chenguang, China	ABS91613
Physiological saline solution	Kelun, China	_
Powerlab ECG	ADINSTRUMENTS ,China	4/35
PVC tube	Guanzhijia, China	_
Small animal ventilator	TECHMAN, China	HX-101E
Sodium Pentobarbital	SIGEMA, USA	1030001
Suction trocar	TECHMAN, China	HX-101E
Suture line	Lingqiao, China	4-0
Suture needle with thread	Shanghai Pudong Jinhua Medical Products Co LTD, China	6-0