Un ensayo basado en fluorescencia del potencial de membrana para el estudio funcional de alto rendimiento de dos canales iónicos endógenos en dos líneas celulares epiteliales

Los estudios basados en fluorescencia son adecuados para ensayos de lectores de placas de alto rendimiento de células en cultivo. Se han empleado comúnmente para campañas de descubrimiento de fármacos dirigidas a proteínas recombinantes del canal iónico sobreexpresadas en células como las células HEK-293. Sin embargo, hay un énfasis creciente en el uso de líneas celulares relevantes para el tejido para estudiar los efectos de las intervenciones de moléculas pequeñas. El siguiente protocolo describe la adaptación de un ensayo de potencial de membrana basado en fluorescencia para el estudio de canales iónicos expresados endógenamente en líneas celulares epiteliales. El ensayo de potencial de membrana detalla un ensayo de alto rendimiento para la actividad del canal de cloruro del regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quística (CFTR) en dos líneas celulares epiteliales comúnmente estudiadas, Caco-2 y Calu-3. Además, este documento describe una aplicación novedosa de este sistema para medir la actividad del canal epitelial de sodio (ENaC) en un formato de alto rendimiento en las mismas líneas celulares epiteliales. Juntos, estos ensayos basados en fluorescencia proporcionan una plataforma robusta y flexible para estudiar moduladores de moléculas pequeñas, dirigidos a dos canales epiteliales en un contexto celular relevante.