Undersøgelse af scarless vævsregenerering i embryonale sårede kyllingehornhinder

Chick embryonale hornhinde sår viser en bemærkelsesværdig evne til fuldt og hurtigt at regenerere, mens voksne sårede hornhinder oplever et tab af gennemsigtighed på grund af fibrotisk ardannelse. Vævsintegriteten af skadede embryonale hornhinder genoprettes iboende uden påviselig ardannelse. I betragtning af dets tilgængelighed og lette manipulation er kyllingeembryoet en ideel model til at studere reparation af arløse hornhindesår. Denne protokol demonstrerer de forskellige trin, der er involveret i at såre hornhinden af en embryonal kylling i ovo. For det første vinduesæg i tidlige embryonale aldre for at få adgang til øjet. For det andet udføres en række fysiske manipulationer af de ekstraembryoniske membraner for at sikre, at adgangen til øjet opretholdes gennem senere udviklingsstadier, svarende til når hornhindens tre cellulære lag dannes. For det tredje fremstilles lineære hornhindesår, der trænger ind i det ydre epitellag og det forreste stroma, ved hjælp af en mikrokirurgisk kniv. Regenereringsprocessen eller fuldt restaurerede hornhinder kan analyseres for regenerativt potentiale ved hjælp af forskellige cellulære og molekylære teknikker efter sårproceduren. Undersøgelser til dato ved hjælp af denne model har afsløret, at sårede embryonale hornhinder viser aktivering af keratocytdifferentiering, gennemgår koordineret ombygning af ECM-proteiner til deres oprindelige tredimensionelle makrostruktur og bliver tilstrækkeligt re-innerveret af hornhinde sensoriske nerver. I fremtiden kan den potentielle indvirkning af endogene eller eksogene faktorer på den regenerative proces analyseres i helbredende hornhinder ved hjælp af udviklingsbiologiske teknikker, såsom vævstransplantation, elektroporation, retroviral infektion eller perleimplantation. Den nuværende strategi identificerer den embryonale kylling som et afgørende eksperimentelt paradigme til belysning af de molekylære og cellulære faktorer, der koordinerer arløs heling af hornhindesår.