Очистка убиквитинированных белков p53 из клеток млекопитающих

Убиквитинация — это тип посттрансляционной модификации, которая регулирует не только стабильность, но и локализацию и функцию субстратного белка. Процесс убиквитинирования происходит внутриклеточным образом у эукариот и регулирует практически все основные клеточные биологические процессы. Очистка убиквитинированных белков помогает исследовать роль убиквитинирования в контроле функции субстратных белков. Здесь описана пошаговая процедура очистки убиквитинированных белков в клетках млекопитающих с помощью белка-супрессора опухоли p53 в качестве примера. Убиквитинированные белки р53 очищали в строгих условиях неденатурации и денатурации. Общий клеточный белок p53, помеченный флагом, очищали антифланг-конъюгированной агарозой в неденатурирующих условиях. Альтернативно, общий клеточный убиквитинированный белок, помеченный His, очищали с использованием никелевой смолы в условиях денатурации. Убиквитинированные белки р53 в элюатах были успешно обнаружены со специфическими антителами. Используя эту процедуру, убиквитинированные формы данного белка могут быть эффективно очищены от клеток млекопитающих, что облегчает исследования роли убиквитинирования в регулировании функции белка.