वातानुकूलित सेल कल्चर मीडिया से एक्स्ट्रासेल्युलर पुटिकाओं को अलग करने के लिए आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी

एक्स्ट्रासेल्युलर वेसिकल्स (ईवी) नैनो-आकार के लिपिड-झिल्ली बाध्य संरचनाएं हैं जो सभी कोशिकाओं से जारी की जाती हैं, सभी बायोफ्लुइड्स में मौजूद होती हैं, और इसमें प्रोटीन, न्यूक्लिक एसिड और लिपिड होते हैं जो मूल कोशिका के प्रतिबिंबित होते हैं जिनसे वे प्राप्त होते हैं। एक नमूने में अन्य घटकों से ईवी का उचित पृथक्करण उनके संबंधित कार्गो के लक्षण वर्णन की अनुमति देता है और कई बीमारियों के लिए इंटरसेलुलर संचारकों और गैर-इनवेसिव बायोमार्कर के रूप में उनकी क्षमता में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है। वर्तमान अध्ययन में, ऑलिगोडेंड्रोसाइट व्युत्पन्न ईवी को अत्याधुनिक तकनीकों के संयोजन का उपयोग करके सेल कल्चर मीडिया से अलग किया गया था, जिसमें अल्ट्राफिल्ट्रेशन और आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी (एसईसी) शामिल हैं ताकि ईवी को अन्य बाह्य प्रोटीन और प्रोटीन कॉम्प्लेक्स से अलग किया जा सके। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एसईसी कॉलम का उपयोग करते हुए, ईवी को नियंत्रण और एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर) तनाव स्थितियों दोनों के तहत मानव ऑलिगोडेंड्रोग्लिओमा कोशिकाओं से जारी बाह्य प्रोटीन से अलग किया गया था। कैननिकल ईवी मार्कर सीडी 9, सीडी 63, और सीडी 81 को अंश 1-4 में देखा गया था, लेकिन अंश 5-8 में नहीं। जीएम 130, गोल्गी तंत्र का एक प्रोटीन, और कैलनेक्सिन, ईआर का एक अभिन्न प्रोटीन, नकारात्मक ईवी मार्करों के रूप में उपयोग किया गया था, और किसी भी अंश में नहीं देखा गया था। इसके अलावा, जब ईवी अंश के रूप में अंश 1-4 और प्रोटीन अंश के रूप में अंश 5-8 को पूलिंग और केंद्रित किया जाता है, तो ईवी अंश में सीडी 63, सीडी 81 और सीडी 9 की अभिव्यक्ति देखी गई थी। जीएम 130 या कैलनेक्सिन की अभिव्यक्ति किसी भी अंश प्रकार में नहीं देखी गई थी। नियंत्रण और ईआर तनाव दोनों स्थितियों से पूल किए गए अंशों को ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के साथ देखा गया था और ईवी अंशों में पुटिकाओं को देखा गया था, लेकिन प्रोटीन अंशों में नहीं। दोनों स्थितियों से ईवी और प्रोटीन अंशों में कणों को भी नैनोपार्टिकल ट्रैकिंग विश्लेषण के साथ परिमाणित किया गया था। साथ में, इन आंकड़ों से पता चलता है कि एसईसी वातानुकूलित सेल संस्कृति मीडिया से ईवी को अलग करने के लिए एक प्रभावी तरीका है।