Нейтронная спектроскопия высокого разрешения для исследования пикосекундно-наносекундной динамики белков и гидратационной воды

Рассеяние нейтронов дает возможность исследовать динамику в образцах для широкого диапазона энергий неразрушающим способом и без маркировки, кроме дейтерия. В частности, спектроскопия обратного рассеяния нейтронов регистрирует сигналы рассеяния при нескольких углах рассеяния одновременно и хорошо подходит для изучения динамики биологических систем на шкале времени ps-ns. Используя_D2O- и, возможно, дейтерированные буферные компоненты, метод позволяет контролировать как диффузию центра масс, так и движения основной цепи и боковой цепи (внутреннюю динамику) белков в жидком состоянии.

Кроме того, динамика гидратационной воды может быть изучена с использованием порошков пердейтерированных белков, гидратированных с H₂O. В этой статье представлен рабочий процесс, используемый на приборе IN16B в Институте Лауэ-Ланжевена (ILL) для исследования динамики белковой и гидратационной воды. Объясняется приготовление образцов раствора и образцов гидратированного протеинового порошка с использованием парообмена. Описана процедура анализа данных как белковой, так и гидратационной динамики воды для различных типов наборов данных (квазиупругие спектры или сканирование с фиксированным окном), которые могут быть получены на спектрометре обратного рассеяния нейтронов.

Метод проиллюстрирован двумя исследованиями с участием амилоидных белков. Показано, что агрегация лизоцима в сферические агрегаты размером с мкм, обозначенные частицами, происходит в одностадийном процессе в пространственно-временном диапазоне, исследованном на IN16B, в то время как внутренняя динамика остается неизменной. Далее изучали динамику гидратации воды тау на гидратированных порошках пердейтерированного белка. Показано, что поступательные движения воды активируются при образовании амилоидных волокон. Наконец, обсуждаются критические шаги в протоколе относительно того, как рассеяние нейтронов позиционируется по отношению к изучению динамики по отношению к другим экспериментальным биофизическим методам.