Generazione robusta e altamente riproducibile di organoidi cerebrali corticali per la modellazione della senescenza neuronale cerebrale in vitro

Gli organoidi cerebrali sono modelli tridimensionali del cervello umano in via di sviluppo e forniscono una piattaforma convincente e all'avanguardia per la modellazione delle malattie e lo screening genomico e farmacologico su larga scala. A causa della natura auto-organizzante delle cellule negli organoidi cerebrali e della crescente gamma di protocolli disponibili per la loro generazione, sono stati identificati problemi di eterogeneità e variabilità tra gli organoidi. In questo documento di protocollo, descriviamo un protocollo robusto e replicabile che supera in gran parte questi problemi e genera organoidi corticali da progenitori neuroectodermici entro 1 mese e che può essere mantenuto per più di 1 anno. Questo protocollo altamente riproducibile può essere facilmente eseguito in una sala di coltura tissutale standard e si traduce in organoidi con una ricca diversità di tipi di cellule che si trovano tipicamente nella corteccia umana in via di sviluppo. Nonostante la loro composizione precoce dello sviluppo, i neuroni e altri tipi di cellule cerebrali umane inizieranno a mostrare i tipici segni di senescenza nelle cellule neuronali dopo una prolungata coltura in vitro , rendendoli una piattaforma preziosa e utile per studiare i processi neuronali legati all'invecchiamento. Questo protocollo delinea anche un metodo per rilevare tali cellule senescenti negli organoidi cerebrali corticali utilizzando la colorazione beta-galattosidasi associata alla senescenza.