Надежная и высоковоспроизводимая генерация органоидов кортикального мозга для моделирования старения нейронов головного мозга in vitro

Органоиды мозга представляют собой трехмерные модели развивающегося человеческого мозга и обеспечивают убедительную, передовую платформу для моделирования заболеваний и крупномасштабного геномного и лекарственного скрининга. Из-за самоорганизующейся природы клеток в органоидах головного мозга и растущего диапазона доступных протоколов для их генерации были выявлены проблемы с гетерогенностью и изменчивостью между органоидами. В этой протокольной статье мы описываем надежный и воспроизводимый протокол, который в значительной степени преодолевает эти проблемы и генерирует кортикальные органоиды из нейроэктодермальных предшественников в течение 1 месяца, и который может поддерживаться более 1 года. Этот высоковоспроизводимый протокол может быть легко выполнен в стандартной комнате для культивирования тканей и приводит к органоидам с богатым разнообразием типов клеток, обычно встречающихся в развивающейся коре головного мозга человека. Несмотря на их ранний состав развития, нейроны и другие типы клеток головного мозга человека начнут проявлять типичные признаки старения в нейронных клетках после длительной культуры in vitro , что делает их ценной и полезной платформой для изучения нейронных процессов, связанных со старением. Этот протокол также описывает метод обнаружения таких стареющих клеток в корковых органоидах головного мозга с использованием окрашивания бета-галактозидазы, связанного со старением.