Abstract
Neuroscience
Los organoides cerebrales son modelos tridimensionales del cerebro humano en desarrollo y proporcionan una plataforma convincente y de vanguardia para el modelado de enfermedades y la detección genómica y farmacológica a gran escala. Debido a la naturaleza autoorganizada de las células en los organoides cerebrales y la creciente gama de protocolos disponibles para su generación, se han identificado problemas con la heterogeneidad y la variabilidad entre los organoides. En este artículo de protocolo, describimos un protocolo robusto y replicable que supera en gran medida estos problemas y genera organoides corticales a partir de progenitores neuroectodérmicos en 1 mes, y que se puede mantener durante más de 1 año. Este protocolo altamente reproducible se puede llevar a cabo fácilmente en una sala de cultivo de tejidos estándar y da como resultado organoides con una rica diversidad de tipos de células que se encuentran típicamente en la corteza humana en desarrollo. A pesar de su composición temprana del desarrollo, las neuronas y otros tipos de células cerebrales humanas comenzarán a exhibir los signos típicos de senescencia en las células neuronales después de un cultivo in vitro prolongado, lo que las convierte en una plataforma valiosa y útil para estudiar los procesos neuronales relacionados con el envejecimiento. Este protocolo también describe un método para detectar tales células senescentes en organoides cerebrales corticales utilizando la tinción de beta-galactosidasa asociada a la senescencia.
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