In situ Hybridisering kombinerad med immunhistokemi i kryosektionerade zebrafiskembryon

Som ryggradsdjur har zebrafisken använts i stor utsträckning i biologiska studier. Zebrafisk och människor delar hög genetisk homologi, vilket möjliggör användning som modell för mänskliga sjukdomar. Genfunktionsstudien baseras på detektion av genuttrycksmönster. Även om immunhistokemi erbjuder ett kraftfullt sätt att analysera proteinuttryck, begränsar det begränsade antalet kommersiellt tillgängliga antikroppar i zebrafisk tillämpningen av costaining. In situ-hybridisering används ofta i zebrafiskembryon för att detektera mRNA-uttryck. Detta protokoll beskriver hur man får bilder genom att kombinera in situ hybridisering och immunhistokemi för zebrafiskembryosektioner. In situ-hybridisering utfördes före kryosektion, följt av antikroppsfärgning. Immunhistokemi och avbildning av en enda kryosektion utfördes efter in situ-hybridisering. Protokollet är till hjälp för att reda ut uttrycksmönstret för två gener, först genom in situ-transkriptdetektion och sedan genom immunhistokemi mot ett protein i samma sektion.