Detección y cuantificación de células que retienen etiquetas en incisivos de ratón utilizando un enfoque de reconstrucción 3D después de la limpieza de tejidos

El incisivo murino es un órgano que crece continuamente a lo largo de la vida útil del ratón. Las células madre epiteliales y mesenquimales que residen en los tejidos proximales de los incisivos dan lugar a una progenie que se diferenciará en ameloblastos, odontoblastos y fibroblastos pulpares. Estas células son cruciales para apoyar la renovación sostenida de los tejidos incisivos, lo que hace que el incisivo murino sea un excelente modelo para estudiar la homeostasis de las células madre adultas. Se cree que las células madre contienen células quiescentes de larga vida que pueden ser marcadas por análogos de nucleótidos como 5-etinil-2'-desoxiuridina (EdU). Las celdas conservan esta etiqueta a lo largo del tiempo y, en consecuencia, se denominan células de retención de etiquetas (LRC). Los enfoques para visualizar las LRC in vivo proporcionan una herramienta sólida para monitorear la homeostasis de las células madre. En este estudio, describimos un método para visualizar y analizar las LRC. Nuestro enfoque innovador presenta LRC en incisivos de ratón después de la limpieza del tejido y la tinción EdU de montaje completo, seguida de microscopía confocal y una reconstrucción tridimensional (3D) con el software de imágenes. Este método permite la adquisición de imágenes 3D y la cuantificación no sesgada en comparación con el análisis tradicional de LRC en diapositivas seccionadas.