इमेजिंग गतिशील सूक्ष्मनलिकाएं और संबद्ध प्रोटीन के लिए एक साथ हस्तक्षेप प्रतिबिंब और कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

साइटोस्केलेटल फिलामेंट्स और उनके संबंधित प्रोटीन के प्रत्यक्ष विज़ुअलाइज़ेशन के लिए कई तकनीकों का उपयोग किया गया है। कुल-आंतरिक-प्रतिबिंब-प्रतिदीप्ति (टीआईआरएफ) माइक्रोस्कोपी में एक उच्च सिग्नल-टू-बैकग्राउंड अनुपात होता है, लेकिन यह फ्लोरोसेंट प्रोटीन के फोटोब्लीचिंग और फोटोडैमेज से ग्रस्त है। लेबल-मुक्त तकनीकें जैसे कि हस्तक्षेप प्रतिबिंब माइक्रोस्कोपी (आईआरएम) और इंटरफेरोमेट्रिक स्कैटरिंग माइक्रोस्कोपी (आईएससीएटी) फोटोब्लीचिंग की समस्या को दरकिनार करती हैं, लेकिन आसानी से एकल अणुओं की कल्पना नहीं कर सकती हैं। यह पेपर सूक्ष्मनलिकाएं-संबद्ध प्रोटीन (एमएपी) और विट्रो में गतिशील सूक्ष्मनलिकाएं की एक साथ इमेजिंग के लिए एक वाणिज्यिक टीआईआरएफ माइक्रोस्कोप के साथ आईआरएम के संयोजन के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है। यह प्रोटोकॉल गतिशील सूक्ष्मनलिकाएं के साथ बातचीत करने वाले एमएपी के उच्च गति के अवलोकन की अनुमति देता है। यह सूक्ष्मनलिका लेबलिंग की आवश्यकता और कई अतिरिक्त ऑप्टिकल घटकों की आवश्यकता, जैसे कि दूसरे उत्तेजना लेजर की आवश्यकता को समाप्त करके मौजूदा दो-रंग टीआईआरएफ सेटअप पर सुधार करता है। दोनों चैनलों को छवि पंजीकरण और फ्रेम सिंक्रनाइज़ेशन समस्याओं से बचने के लिए एक ही कैमरा चिप पर चित्रित किया जाता है। इस सेटअप को गतिशील सूक्ष्मनलिकाएं पर चलने वाले एकल किनेसिन अणुओं की कल्पना करके प्रदर्शित किया जाता है।