केमोसेंसिटिविटी परीक्षण के लिए अग्नाशय के कैंसर से ज़ेबराफिश रोगी-व्युत्पन्न जेनोग्राफ्ट्स की स्थापना

Summary

प्रीक्लिनिकल मॉडल का उद्देश्य कैंसर जीव विज्ञान के ज्ञान को आगे बढ़ाना और उपचार प्रभावकारिता की भविष्यवाणी करना है। यह पेपर ट्यूमर ऊतक के टुकड़ों के साथ ज़ेबराफिश-आधारित रोगी-व्युत्पन्न जेनोग्राफ्ट्स (जेडपीडीएक्स) की पीढ़ी का वर्णन करता है। जेडपीडीएक्स को कीमोथेरेपी के साथ इलाज किया गया था, जिसके चिकित्सीय प्रभाव का मूल्यांकन प्रत्यारोपित ऊतक के सेल एपोप्टोसिस के संदर्भ में किया गया था।

Abstract

कैंसर दुनिया भर में मौत के मुख्य कारणों में से एक है, और कई प्रकार के कैंसर की घटनाओं में वृद्धि जारी है। स्क्रीनिंग, रोकथाम और उपचार के मामले में बहुत प्रगति हुई है; हालांकि, प्रीक्लिनिकल मॉडल जो कैंसर रोगियों की केमोसेंसिटिविटी प्रोफाइल की भविष्यवाणी करते हैं, अभी भी कमी है। इस अंतर को भरने के लिए, एक विवो रोगी-व्युत्पन्न जेनोग्राफ्ट मॉडल विकसित और मान्य किया गया था। मॉडल निषेचन के 2 दिनों के बाद जेब्राफिश (डेनियो रेरियो) भ्रूण पर आधारित था, जिसका उपयोग रोगी के सर्जिकल नमूने से लिए गए ट्यूमर ऊतक के जेनोग्राफ्ट टुकड़ों के प्राप्तकर्ताओं के रूप में किया गया था।

यह भी ध्यान देने योग्य है कि ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को बनाए रखने के लिए बायोप्टिक नमूने पचने या अलग-अलग नहीं थे, जो ट्यूमर व्यवहार और चिकित्सा की प्रतिक्रिया का विश्लेषण करने के संदर्भ में महत्वपूर्ण है। प्रोटोकॉल प्राथमिक ठोस ट्यूमर सर्जिकल रिसेक्शन से ज़ेबराफिश-आधारित रोगी-व्युत्पन्न जेनोग्राफ्ट्स (जेडपीडीएक्स) स्थापित करने के लिए एक विधि का विवरण देता है। एनाटोमोपैथोलॉजिस्ट द्वारा स्क्रीनिंग के बाद, नमूना को स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके विच्छेदित किया जाता है। नेक्रोटिक ऊतक, वाहिकाओं, या वसायुक्त ऊतक को हटा दिया जाता है और फिर 0.3 मिमी x 0.3 मिमी x 0.3 मिमी टुकड़ों में काट दिया जाता है।

टुकड़ों को तब फ्लोरोसेंटली लेबल किया जाता है और ज़ेब्राफिश भ्रूण के पेरिविटेलिन स्पेस में एक्सनोट्रांसप्लांट किया जाता है। बड़ी संख्या में भ्रूण को कम लागत पर संसाधित किया जा सकता है, जिससे कई एंटीकैंसर दवाओं के लिए जेडपीडीएक्स की कीमोसेंसिटिविटी के विवो विश्लेषण में उच्च-थ्रूपुट सक्षम हो सकता है। नियंत्रण समूह की तुलना में कीमोथेरेपी उपचार द्वारा प्रेरित एपोप्टोटिक स्तरों का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए कॉन्फोकल छवियों को नियमित रूप से अधिग्रहित किया जाता है। जेनोग्राफ्ट प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण समय लाभ है, क्योंकि इसे एक ही दिन में पूरा किया जा सकता है, जो सह-नैदानिक परीक्षणों के लिए चिकित्सीय स्क्रीनिंग करने के लिए एक उचित समय खिड़की प्रदान करता है।

Introduction

नैदानिक कैंसर अनुसंधान की समस्याओं में से एक यह है कि कैंसर एक एकल बीमारी नहीं है, बल्कि विभिन्न बीमारियों की एक किस्म है जो समय के साथ विकसित हो सकती है, ट्यूमर की विशेषताओं^{और रोगी 1} के आधार पर विशिष्ट उपचार की आवश्यकता होती है। नतीजतन, चुनौती रोगी-उन्मुख कैंसर अनुसंधान की ओर बढ़ना है, ताकि कैंसर^{उपचार परिणामों की} शुरुआती भविष्यवाणी के लिए नई व्यक्तिगत रणनीतियों की पहचान की जा सके। यह अग्नाशयी डक्टल एडेनोकार्सिनोमा (पीडीएसी) के लिए विशेष रूप से प्रासंगिक है, क्योंकि इसे 11% ³ की 5 साल की जीवित रहने की दर के साथ एक कठिन-से-इलाज कैंसर माना जाता है।

देर से निदान, तेजी से प....

Protocol

इतालवी सार्वजनिक स्वास्थ्य मंत्रालय ने जानवरों के उपयोग और देखभाल पर निर्देश 2010/63 / यूरोपीय संघ के अनुरूप वर्णित सभी पशु प्रयोगों को मंजूरी दी। स्थानीय नैतिक समिति ने पंजीकरण संख्या 70213 के तहत अध्ययन को .......

Discussion

कैंसर अनुसंधान में विवो मॉडल कैंसर जीव विज्ञान को समझने और कैंसर उपचार प्रतिक्रिया की भविष्यवाणी करने के लिए अमूल्य उपकरण प्रदान करते हैं। वर्तमान में, विवो मॉडल में अलग-अलग उपलब्ध हैं, उदाहरण ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
5-fluorouracil	Teva Pharma AG	SMP 1532755
48 multiwell plate	Sarstedt	83 3923
96 multiwell plate	Sarstedt	82.1581.001
Acetone	Merck	179124
Agarose powder	Merck	A9539
Amphotericin	Thermo Fisher Scientific	15290018
Anti-Nuclei Antibody, clone 235-1	Merck	MAB1281	1:200 dilution
Aquarium net QN6	Penn-plax	0-30172-23006-6
BSA	Merck	A9418
CellTrace	Thermo Fisher Scientific	C34567
CellTracker CM-DiI	Thermo Fisher Scientific	C7001
CellTracker Deep Red	Thermo Fisher Scientific	C34565
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb	Cell Signaling Technology	9661S	1:250 dilution
Dimethyl sulfoxide (DMSO)	PanReac AppliChem ITW Reagents	A3672,0250
Dumont #5 forceps	World Precision Instruments	501985
Folinic acid -  Lederfolin	Pfizer
Glass capillaries, 3.5"	Drummond Scientific Company	3-000-203-G/X	Outer diameter = 1.14 mm. Inner diameter = 0.53 mm.
Glass vials	VWR International	WHEAW224581
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647	Thermo Fisher Scientific	A-21244	1:500 dilution
Goat serum	Thermo Fisher Scientific	31872
Hoechst 33342	Thermo Fisher Scientific	H3570
Irinotecan	Hospira
Low Temperature Freezer Vials	VWR International	479-1220
McIlwain Tissue Chopper	World Precision Instruments
Microplate Mixer	SCILOGEX	822000049999
Oxaliplatin	Teva
Paraformaldehyde	Merck	P6148-500G
PBS	Thermo Fisher Scientific	14190094
Penicillin-streptomycin	Thermo Fisher Scientific	15140122
Petri dish 100 mm	Sarstedt	83 3902500
Petri dish 60 mm	Sarstedt	83 3901
Plastic Pasteur pipette	Sarstedt	86.1171.010
Poly-Mount	Tebu-bio	18606-5
Propidium iodide	Merck	P4170
RPMI-1640 medium	Thermo Fisher Scientific	11875093
Scalpel blade No 10 Sterile Stainless Steel	VWR International	SWAN3001
Scalpel handle #3	World Precision Instruments	500236
Tricaine	Merck	E10521
Triton X-100	Merck	T8787
Tween 20	Merck	P9416
Vertical Micropipette Puller	Shutter instrument	P-30