A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Kemosensitivite Testi için Pankreas Kanserinden Zebra Balığı Hasta Kaynaklı Ksenogreftlerin Kurulması
In This Article
Summary
Preklinik modeller, kanser biyolojisi bilgisini ilerletmeyi ve tedavi etkinliğini öngörmeyi amaçlamaktadır. Bu yazıda, zebra balığı bazlı hasta kaynaklı ksenogreftlerin (zPDX'ler) tümör doku fragmanları ile üretilmesi açıklanmaktadır. zPDX'ler, terapötik etkisi nakledilen dokunun hücre apoptozu açısından değerlendirilen kemoterapi ile tedavi edildi.
Abstract
Kanser, dünya çapında başlıca ölüm nedenlerinden biridir ve birçok kanser türünün görülme sıklığı artmaya devam etmektedir. Tarama, önleme ve tedavi açısından çok ilerleme kaydedilmiştir; Bununla birlikte, kanser hastalarının kemosensitivite profilini öngören preklinik modeller hala eksiktir. Bu boşluğu doldurmak için, in vivo hasta kaynaklı bir ksenogreft modeli geliştirildi ve doğrulandı. Model, döllenmeden 2 gün sonra zebra balığı (Danio rerio) embriyolarına dayanıyordu ve bunlar bir hastanın cerrahi örneğinden alınan tümör dokusunun ksenogreft parçalarının alıcıları olarak kullanıldı.
Ayrıca, tümör davranışını ve tedaviye yanıtı analiz etmek açısından çok önemli olan tümör mikroçevresini korumak için bioptik örneklerin sindirilmediğini veya ayrıştırılmadığını da belirtmek gerekir. Protokol, primer solid tümör cerrahi rezeksiyonundan zebra balığı bazlı hasta kaynaklı ksenogreftler (zPDX'ler) oluşturmak için bir yöntemi detaylandırmaktadır. Bir anatomopatolog tarafından tarandıktan sonra, örnek bir neşter bıçağı kullanılarak diseke edilir. Nekrotik doku, damarlar veya yağ dokusu çıkarılır ve daha sonra 0,3 mm x 0,3 mm x 0,3 mm parçalar halinde doğranır.
Parçalar daha sonra floresan olarak etiketlenir ve zebra balığı embriyolarının perivitelin boşluğuna ksenotransplante edilir. Çok sayıda embriyo düşük maliyetle işlenebilir, bu da zPDX'lerin çoklu antikanser ilaçlarına karşı kemosensitivitesinin yüksek verimli in vivo analizlerini sağlar. Konfokal görüntüler, kontrol grubuna kıyasla kemoterapi tedavisinin neden olduğu apoptotik seviyeleri tespit etmek ve ölçmek için rutin olarak edinilir. Ksenograft prosedürü önemli bir zaman avantajına sahiptir, çünkü tek bir günde tamamlanabilir ve ortak klinik çalışmalar için terapötik bir tarama yapmak için makul bir zaman aralığı sağlar.
Introduction
Klinik kanser araştırmalarının sorunlarından biri, kanserin tek bir hastalık değil, zamanla gelişebilen, tümörün kendisinin ve hastanın özelliklerine bağlı olarak spesifik tedaviler gerektiren çeşitli farklı hastalıklar olmasıdır1. Sonuç olarak, zorluk, kanser tedavisi sonuçlarının erken tahmini için yeni kişiselleştirilmiş stratejiler belirlemek amacıyla hasta odaklı kanser araştırmalarına doğru ilerlemektir2. Bu özellikle pankreatik duktal adenokarsinom (PDAC) ile ilgilidir, çünkü 5 yıllık sağkalım oranı% 11 olan tedavisi zor bir kanser olarak kabul edilir3.
Geç tanı,....
Protocol
İtalya Halk Sağlığı Bakanlığı, hayvanların kullanımı ve bakımına ilişkin 2010/63/EU sayılı Direktife uygun olarak açıklanan tüm hayvan deneylerini onayladı. Yerel Etik Kurul, çalışmayı 70213 kayıt numarası altında onayladı. İlgili tüm deneklerden bilgilendirilmiş onam alındı. Başlamadan önce, tüm çözeltiler ve ekipmanlar hazırlanmalı (bölüm 1) ve balıklar çaprazlanmalıdır (bölüm 2).
1. Çözeltilerin ve ekipmanların hazırlanması.......
Representative Results
Bu protokol, primer insan pankreas adenokarsinomundan zPDX'lerin oluşturulması için deneysel yaklaşımı açıklamaktadır. Bir tümör örneği, protokol bölüm 4'te açıklandığı gibi floresan boya kullanılarak toplandı, kıyıldı ve boyandı. zPDX'ler daha sonra, protokol bölüm 5'te açıklandığı gibi, 2 dpf zebra balığı embriyosunun perivitelin boşluğuna bir tümör parçasının implantasyonu ile başarılı bir şekilde kurulmuştur. Protokol bölüm 6'da açıklandığı gibi, zPDX'ler hasta k.......
Discussion
Kanser araştırmalarındaki in vivo modeller, kanser biyolojisini anlamak ve kanser tedavisi yanıtını tahmin etmek için paha biçilmez araçlar sağlar. Şu anda, farklı in vivo modeller mevcuttur, örneğin, genetiği değiştirilmiş hayvanlar (transgenik ve nakavt fareler) veya insan birincil hücrelerinden hasta kaynaklı ksenogreftler. Birçok optimum özelliğe rağmen, her birinin çeşitli sınırlamaları vardır. Özellikle, yukarıda belirtilen modeller, hastanın tümör dokusu mikroç.......
Acknowledgements
Bu çalışma Fondazione Pisa tarafından finanse edildi (proje 114/16). Yazarlar, hasta örneklem seçimi ve patoloji desteği için Azienda Ospedaliera Pisana Histopatoloji Birimi'nden Raffaele Gaeta'ya teşekkür eder. Ayrıca Alessia Galante'ye deneylerdeki teknik desteği için teşekkür ederiz. Bu makale, COST (European Cooperation in Science and Technology) tarafından desteklenen COST Action TRANSPAN, CA21116'in çalışmalarına dayanmaktadır.
....Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5-fluorouracil | Teva Pharma AG | SMP 1532755 | |
| 48 multiwell plate | Sarstedt | 83 3923 | |
| 96 multiwell plate | Sarstedt | 82.1581.001 | |
| Acetone | Merck | 179124 | |
| Agarose powder | Merck | A9539 | |
| Amphotericin | Thermo Fisher Scientific | 15290018 | |
| Anti-Nuclei Antibody, clone 235-1 | Merck | MAB1281 | 1:200 dilution |
| Aquarium net QN6 | Penn-plax | 0-30172-23006-6 | |
| BSA | Merck | A9418 | |
| CellTrace | Thermo Fisher Scientific | C34567 | |
| CellTracker CM-DiI | Thermo Fisher Scientific | C7001 | |
| CellTracker Deep Red | Thermo Fisher Scientific | C34565 | |
| Cleaved Caspase-3 (Asp175) (5A1E) Rabbit mAb | Cell Signaling Technology | 9661S | 1:250 dilution |
| Dimethyl sulfoxide (DMSO) | PanReac AppliChem ITW Reagents | A3672,0250 | |
| Dumont #5 forceps | World Precision Instruments | 501985 | |
| Folinic acid - Lederfolin | Pfizer | ||
| Glass capillaries, 3.5" | Drummond Scientific Company | 3-000-203-G/X | Outer diameter = 1.14 mm. Inner diameter = 0.53 mm. |
| Glass vials | VWR International | WHEAW224581 | |
| Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 647 | Thermo Fisher Scientific | A-21244 | 1:500 dilution |
| Goat serum | Thermo Fisher Scientific | 31872 | |
| Hoechst 33342 | Thermo Fisher Scientific | H3570 | |
| Irinotecan | Hospira | ||
| Low Temperature Freezer Vials | VWR International | 479-1220 | |
| McIlwain Tissue Chopper | World Precision Instruments | ||
| Microplate Mixer | SCILOGEX | 822000049999 | |
| Oxaliplatin | Teva | ||
| Paraformaldehyde | Merck | P6148-500G | |
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 14190094 | |
| Penicillin-streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15140122 | |
| Petri dish 100 mm | Sarstedt | 83 3902500 | |
| Petri dish 60 mm | Sarstedt | 83 3901 | |
| Plastic Pasteur pipette | Sarstedt | 86.1171.010 | |
| Poly-Mount | Tebu-bio | 18606-5 | |
| Propidium iodide | Merck | P4170 | |
| RPMI-1640 medium | Thermo Fisher Scientific | 11875093 | |
| Scalpel blade No 10 Sterile Stainless Steel | VWR International | SWAN3001 | |
| Scalpel handle #3 | World Precision Instruments | 500236 | |
| Tricaine | Merck | E10521 | |
| Triton X-100 | Merck | T8787 | |
| Tween 20 | Merck | P9416 | |
| Vertical Micropipette Puller | Shutter instrument | P-30 |
References
- Rubin, H. Understanding cancer. Science. 219 (4589), 1170-1172 (1983).
- Krzyszczyk, P., et al. The growing role of precision and personalized medicine for cancer treatment. Technology. 6 (3-4), 79-100 (2018).<....
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved