Isolement, culture et caractérisation des cellules de Schwann primaires, des kératinocytes et des fibroblastes du prépuce humain

Ce protocole décrit les méthodes d’isolement, les conditions de culture et la caractérisation des cellules primaires humaines à haut rendement et viabilité en utilisant la dissociation enzymatique rapide de la peau. Les kératinocytes primaires, les fibroblastes et les cellules de Schwann sont tous prélevés sur le prépuce du nouveau-né humain, qui est disponible selon les procédures de soins standard. La peau enlevée est désinfectée et la graisse et les muscles sous-cutanés sont enlevés à l’aide d’un scalpel. La méthode consiste en une séparation enzymatique et mécanique des couches épidermique et dermique, suivie d’une digestion enzymatique supplémentaire pour obtenir des suspensions unicellulaires de chacune de ces couches cutanées. Enfin, les cellules individuelles sont cultivées dans des milieux de culture cellulaire appropriés en suivant les protocoles de culture cellulaire standard pour maintenir la croissance et la viabilité pendant des semaines. Ensemble, ce protocole simple permet l’isolement, la culture et la caractérisation des trois types de cellules à partir d’un seul morceau de peau pour l’évaluation in vitro de modèles peau-nerf. De plus, ces cellules peuvent être utilisées ensemble dans des co-cultures pour évaluer leurs effets les uns sur les autres et leurs réponses aux traumatismes in vitro sous la forme de égratignures effectuées robotiquement dans la culture associée à la cicatrisation des plaies.