Ex Vivo Modelo organoide de deleciones genéticas mediadas por adenovirus-Cre en células uroteliales de ratón

El cáncer de vejiga es un área poco estudiada, particularmente en modelos de ratón genéticamente modificados (GEMM). Los GEMM endogámicos con sitios Cre y loxP específicos de tejidos han sido los estándares de oro para la orientación génica condicional o inducible. Para proporcionar modelos experimentales más rápidos y eficientes, se desarrolla un sistema de cultivo de organoides ex vivo utilizando adenovirus Cre y células uroteliales normales que transportan múltiples alelos loxP de los supresores tumorales Trp53, Pten y Rb1. Las células uroteliales normales se disocian enzimáticamente de cuatro vejigas de ratones triple floxed (Trp53^f/f: Pten^f/f: Rb1^f/f). Las células uroteliales se transducen ex vivo con adenovirus-Cre impulsado por un promotor del CMV (Ad5CMVCre). Los organoides vesicales transducidos se cultivan, propagan y caracterizan in vitro e in vivo. La PCR se utiliza para confirmar las deleciones de genes en Trp53, Pten y Rb1. La tinción de inmunofluorescencia (IF) de organoides demuestra una expresión positiva de los marcadores de linaje urotelial (CK5 y p63). Los organoides se inyectan por vía subcutánea en ratones huésped para la expansión del tumor y los pasajes en serie. La inmunohistoquímica (IHC) de los xenoinjertos exhibe expresión positiva de CK7, CK5 y p63 y expresión negativa de CK8 y Uroplakin 3. En resumen, la deleción de genes mediada por adenovirus de células uroteliales de ratón diseñadas con sitios loxP es un método eficiente para probar rápidamente el potencial tumorígeno de alteraciones genéticas definidas.