Kvantitativ 3D-billeddannelse af Trypanosoma cruzi-inficerede celler, sovende amastigotes og T-celler i intakte klargjorte organer

Chagas sygdom er en forsømt patologi, der påvirker millioner af mennesker over hele verden, hovedsageligt i Latinamerika. Chagas sygdomsmiddel, Trypanosoma cruzi (T. cruzi), er en obligatorisk intracellulær parasit med en forskelligartet biologi, der inficerer flere pattedyrarter, herunder mennesker, der forårsager hjerte- og fordøjelsespatologier. Pålidelig påvisning af T. cruzi in vivo-infektioner har længe været nødvendig for at forstå Chagas sygdoms komplekse biologi og nøjagtigt evaluere resultatet af behandlingsregimer. Den nuværende protokol demonstrerer en integreret pipeline til automatiseret kvantificering af T. cruzi-inficerede celler i 3D-rekonstruerede, ryddede organer. Lysark fluorescerende mikroskopi giver mulighed for nøjagtigt visualisering og kvantificering af aktivt prolifererende og sovende T. cruzi parasitter og immuneffektorceller i hele organer eller væv. CUBIC-HistoVision-rørledningen for at opnå ensartet mærkning af ryddede organer med antistoffer og nukleare pletter blev også vedtaget med succes. Vævsrensning kombineret med 3D-immunostaining giver en upartisk tilgang til omfattende evaluering af lægemiddelbehandlingsprotokoller, forbedrer forståelsen af den cellulære organisation af T. cruzi-inficerede væv og forventes at fremme opdagelser relateret til anti-T. cruzi-immunresponser, vævsskade og reparation i Chagas sygdom.