用于鉴定裂殖酵母多拷贝抑制因子的遗传筛选

遗传相互作用的鉴定是通过深入了解基因与其他基因的功能关系以及生物途径和过程的组织来破译基因功能的有力工具。虽然大多数遗传筛选最初是在 酿酒酵母中开发的，但 Pombe裂殖酵母提供了进行这些遗传筛选的补充平台。用于鉴定遗传相互作用的常用方法之一是在功能丧失突变体中过表达全基因组高拷贝数质粒文库中的克隆，然后选择抑制突变表型的克隆。

本文描述了一种在 庞贝链球菌中进行这种基于“多拷贝抑制”的遗传筛选的方案。该筛选有助于鉴定与 S. pombe 中缺乏 Ell1 转录伸长因子相关的遗传毒性应激敏感表型的多拷贝抑制因子。筛选是通过将查询 ell1 零突变株与高拷贝数 S. pombe cDNA质粒文库的转化并在含有4-硝基喹啉1-氧化物（4-NQO）的EMM2平板上选择抑制子（一种遗传毒性应激诱导化合物）来启动的。随后，从两个入围的抑制菌落中分离质粒，并通过限制性内切酶消化以释放插入片段DNA。释放插入片段DNA片段的质粒被重新转化为ell1缺失菌株，以确认这些抑制质粒克隆在4-NQO和其他遗传毒性化合物存在下恢复 ell1 缺失突变体生长的能力。 对那些显示缺失表型拯救的质粒进行测序，以鉴定负责抑制 ell1 缺失相关遗传毒性应激敏感表型的基因。