从未受干扰和受伤的小鼠骨骼肌中分离和培养纤维脂肪祖细胞和肌肉干细胞的FACS-分离和培养

纤维脂肪祖细胞 （FAP） 是一组骨骼肌驻留间充质基质细胞 （MSC），能够沿纤维化、成脂、成骨或成软骨谱系分化。FAP与肌肉干细胞（MuSC）一起在肌肉稳态，修复和再生中起着关键作用，同时积极维持和重塑细胞外基质（ECM）。在病理条件下，例如慢性损伤和肌肉萎缩症，FAPs经历异常激活并分化为产生胶原蛋白的成纤维细胞和脂肪细胞，导致纤维化和肌内脂肪浸润。因此，FAP在肌肉再生中起着双重作用，通过维持MuSC更新和促进组织修复或促进纤维化瘢痕形成和异位脂肪浸润，从而损害骨骼肌组织的完整性和功能。FAP和MuSCs的适当纯化是了解这些细胞在生理和病理条件下的生物学作用的先决条件。在这里，我们描述了一种使用荧光激活细胞分选（FACS）从成年小鼠的肢体肌肉中同时分离FAP和MuSC的标准化方法。该协议详细描述了来自整个肢体肌肉和受伤的胫骨前（TA）肌肉的单核细胞的机械和酶解离。随后使用半自动细胞分选仪分离FAP和MuSC，以获得纯细胞群。我们还描述了一种单独或在共培养条件下培养静态和活化FAP和MuSC的优化方法。