In vitro Apical-out Enteroid modell av nekrotiserande enterokolit

Nekrotiserande enterokolit (NEC) är en förödande sjukdom som drabbar för tidigt födda barn, kännetecknad av tarminflammation och nekros. Enteroider har nyligen framträtt som ett lovande system för att modellera gastrointestinala patologier. Men för närvarande används metoder för enteroid manipulation antingen saknar tillgång till epitelets apikala yta (tredimensionell [3D]) eller är tidskrävande och resurskrävande (tvådimensionella [2D] monolager). Dessa metoder kräver ofta ytterligare steg, såsom mikroinjektion, för att modellen ska bli fysiologiskt översättbar. Här beskriver vi ett fysiologiskt relevant och billigt protokoll för att studera NEC in vitro genom att vända enteroidpolaritet, vilket resulterar i att den apikala ytan vetter utåt (apikal-ut). Ett immunofluorescerande färgningsprotokoll för att undersöka enteroidbarriärens integritet och korsande proteinuttryck efter exponering för tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-α) eller lipopolysackarid (LPS) under normoxiska eller hypoxiska förhållanden tillhandahålls också. Viabiliteten hos 3D-apikala enteroider som utsätts för normoxiska eller hypoxiska LPS eller TNF-α i 24 timmar utvärderas också. Enteroider som utsattes för antingen LPS eller TNF-α, i kombination med hypoxi, uppvisade störningar i epitelarkitekturen, en förlust av adherens korsningsproteinuttryck och en minskning av cellviabiliteten. Detta protokoll beskriver en ny apikal-ut NEC-in-a-dish-modell som presenterar en fysiologiskt relevant och kostnadseffektiv plattform för att identifiera potentiella epitelmål för NEC-terapier och studera det prematura tarmsvaret på terapier.