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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Vari modelli animali di fibrosi polmonare sono stati stabiliti utilizzando la bleomicina per chiarire la patogenesi della fibrosi polmonare e trovare nuovi bersagli farmacologici. Tuttavia, la maggior parte dei modelli di fibrosi polmonare mirati al tessuto polmonare hanno una somministrazione irregolare del farmaco. Qui, proponiamo un modello di fibrosi polmonare uniforme indotta dalla nebulizzazione nasale di bleomicina.

Abstract

La fibrosi polmonare è caratteristica di diverse malattie polmonari umane che derivano da varie cause. Dato che le opzioni di trattamento sono piuttosto limitate, i modelli murini continuano ad essere uno strumento importante per lo sviluppo di nuove strategie antifibrotiche. In questo studio, la somministrazione intrapolmonare di bleomicina (BLM) viene effettuata mediante nebulizzazione nasale per creare un modello murino di fibrosi polmonare che imita da vicino le caratteristiche cliniche della malattia. I topi C57BL/6 hanno ricevuto BLM (7 U/mL, 30 min/die) mediante nebulizzazione nasale per 3 giorni consecutivi e sono stati sacrificati il giorno 9, 16 o 23 per osservare i cambiamenti infiammatori e fibrotici nel tessuto polmonare. Il BLM aerosolizzato nasale ha preso di mira direttamente i polmoni, provocando infiammazione polmonare e fibrosi diffuse e uniformi. Pertanto, abbiamo generato con successo un modello murino sperimentale di fibrosi polmonare umana tipica. Questo metodo potrebbe essere facilmente utilizzato per studiare gli effetti della somministrazione di vari aerosol nasali sulla fisiopatologia polmonare e convalidare nuovi trattamenti antinfiammatori e antifibrotici.

Introduction

La fibrosi polmonare è un processo patologico progressivo in cui l'eccessiva deposizione di componenti della matrice extracellulare, principalmente il collagene di tipo I, nell'interstizio dei polmoni porta a una compromissione della funzione polmonare1. La fisiopatologia della fibrosi polmonare è complessa e le opzioni di trattamento sono attualmente piuttosto limitate. I modelli murini rimangono uno strumento importante per studiare i meccanismi patogenetici che contribuiscono all'insorgenza e alla progressione della malattia, nonché nuove strategie per lo sviluppo di farmaci.

Protocol

Il Comitato per gli studi sugli animali dell'Ospedale dell'amicizia Cina-Giappone (Pechino, Cina) ha approvato tutte le procedure che coinvolgono i topi che sono state eseguite nell'ambito di questo studio (NO.190108). I topi sono stati tenuti nella stanza sterile degli animali dell'Istituto di ricerca medica clinica dell'amicizia Cina-Giappone, con una temperatura ambiente di 20-25 °C, umidità relativa del 40%-70%, intensità della luce animale di 15-20 LX e alternanza di luce e buio .......

Representative Results

Il danno polmonare è stato indotto da BLM nebulizzato e gli animali di controllo sono stati nebulizzati con lo stesso volume di soluzione fisiologica normale. I topi sono stati nebulizzati una volta al giorno per 3 giorni, 30 minuti al giorno, utilizzando una concentrazione di BLM di 7 U/mL. I topi sono stati sacrificati nei giorni 9, 16 e 23 dopo la somministrazione di BLM per la colorazione H&E (Figura 2B). Lesioni polmonari diffuse con perdita della normale architett.......

Discussion

L'iniezione intratracheale di bleomicina provoca una risposta infiammatoria acuta e fibrotica in entrambi i polmoni e può essere considerata un approccio efficace per stabilire un modello murino sperimentale di malattia polmonare interstiziale umana. La somministrazione intratracheale è la via di somministrazione più comunemente utilizzata 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.

Disclosures

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (n. 92068108).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
 bleomycinBioway/Nippon Kayaku Co Ltd DP721Fibrosis model drugs
0.9% saline for injectionBaxter Healthcare(Tianjin)Co.,Ltd.Bleomycin preparation
1 mL syringeBD300481Anesthetize animals
10% neutral formalin bufferTechaLab Biotech CompanyFix lung tissue
15 mL centrifuge tubecorning430790Prepare for anesthesia
20 °C refrigeratorNew-fly groupBCD-213KStore drugs
4 °C refrigeratorNew-fly groupBCD-213KStore drugs
Adobe illustrator cc2020AdobeProcess images
blue back liquidBeijing Chemical Workstissue staining
clean benchSuzhou Sujie Purifying Equipment Co.,Ltd.Bleomycin preparation
differentiation fluidBeijing Chemical Workstissue staining
Electronic balanceMETTLER TOLEDOAA-160Prepare for anesthesia
eosin stainBeijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.tissue staining
Heating padHIDOMMice incubation
hematoxylin stainBeijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.tissue staining
phosphate buffered saline (PBS) bufferHycloneSH30256.01Clean lung tissue
Photoshop drawing softwareAdobeProcess images
SCIREQ INEXPOSEEMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.Atomizing device
Upright fluorescence microscopeOlympusBX53Observe the slice

References

  1. Raghu, G., et al. Diagnosis of idiopathic pulmonary fibrosis. An official ATS/ERS/JRS/ALAT clinical practice guideline. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 198 (5), e44-e68 (2018).
  2. Moore, B. B., Hogaboam, C. M.

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