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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Vários modelos animais de fibrose pulmonar foram estabelecidos usando bleomicina para esclarecer a patogênese da fibrose pulmonar e encontrar novos alvos de drogas. No entanto, a maioria dos modelos de fibrose pulmonar direcionados ao tecido pulmonar tem administração desigual de medicamentos. Aqui, propomos um modelo de fibrose pulmonar uniforme induzida por nebulização de bleomicina nasal.

Abstract

A fibrose pulmonar é característica de várias doenças pulmonares humanas que surgem de várias causas. Dado que as opções de tratamento são bastante limitadas, os modelos de camundongos continuam a ser uma ferramenta importante para o desenvolvimento de novas estratégias antifibróticas. Neste estudo, a administração intrapulmonar de bleomicina (BLM) é realizada por nebulização nasal para criar um modelo de camundongo de fibrose pulmonar que imita de perto as características clínicas da doença. Camundongos C57BL/6 receberam BLM (7 U/mL, 30 min/dia) por nebulização nasal por 3 dias consecutivos e foram sacrificados no dia 9, 16 ou 23 para observar alterações inflamatórias e fibróticas no tecido pulmonar. O BLM aerossolizado nasal atingiu diretamente os pulmões, resultando em inflamação e fibrose pulmonar generalizada e uniforme. Assim, geramos com sucesso um modelo experimental de camundongo de fibrose pulmonar humana típica. Este método poderia ser facilmente usado para estudar os efeitos da administração de vários aerossóis nasais na fisiopatologia pulmonar e validar novos tratamentos anti-inflamatórios e antifibróticos.

Introduction

A fibrose pulmonar é um processo de doença progressiva no qual a deposição excessiva de componentes da matriz extracelular, principalmente colágeno tipo I, no interstício dos pulmões leva ao comprometimento da função pulmonar1. A fisiopatologia da fibrose pulmonar é complexa e as opções de tratamento são atualmente bastante limitadas. Os modelos de camundongos continuam sendo uma ferramenta importante para estudar os mecanismos patogênicos que contribuem para o surgimento e progressão da doença, bem como novas estratégias para o desenvolvimento de medicamentos.

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Protocol

O Comitê de Estudos Animais do Hospital da Amizade China-Japão (Pequim, China) aprovou todos os procedimentos envolvendo camundongos que foram realizados como parte deste estudo (NO.190108). Os camundongos foram mantidos na sala de animais estéreis do Instituto de Pesquisa Médica Clínica da Amizade China-Japão, com temperatura ambiente de 20-25 °C, umidade relativa de 40%-70%, intensidade de luz animal de 15-20 LX e luz e escuridão alternadas por 12 h/12 h. Os animais tinham livr.......

Representative Results

A lesão pulmonar foi induzida por BLM nebulizada, e os animais controle foram nebulizados com o mesmo volume de solução salina normal. Os camundongos foram nebulizados uma vez ao dia durante 3 dias, 30 min por dia, usando uma concentração de BLM de 7 U / mL. Os camundongos foram sacrificados nos dias 9, 16 e 23 após a administração de BLM para coloração H & E ( Figura 2B ). Lesões pneumônicas difusas com perda da arquitetura alveolar normal, espessamento sept.......

Discussion

A injeção intratraqueal de bleomicina resulta em uma resposta inflamatória e fibrótica aguda em ambos os pulmões e pode ser considerada uma abordagem eficaz para estabelecer um modelo experimental de camundongo de doença pulmonar intersticial humana. A administração intratraqueal é a via de administração mais comumente utilizada 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.

Acknowledgements

Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (nº 92068108).

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Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
 bleomycinBioway/Nippon Kayaku Co Ltd DP721Fibrosis model drugs
0.9% saline for injectionBaxter Healthcare(Tianjin)Co.,Ltd.Bleomycin preparation
1 mL syringeBD300481Anesthetize animals
10% neutral formalin bufferTechaLab Biotech CompanyFix lung tissue
15 mL centrifuge tubecorning430790Prepare for anesthesia
20 °C refrigeratorNew-fly groupBCD-213KStore drugs
4 °C refrigeratorNew-fly groupBCD-213KStore drugs
Adobe illustrator cc2020AdobeProcess images
blue back liquidBeijing Chemical Workstissue staining
clean benchSuzhou Sujie Purifying Equipment Co.,Ltd.Bleomycin preparation
differentiation fluidBeijing Chemical Workstissue staining
Electronic balanceMETTLER TOLEDOAA-160Prepare for anesthesia
eosin stainBeijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.tissue staining
Heating padHIDOMMice incubation
hematoxylin stainBeijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.tissue staining
phosphate buffered saline (PBS) bufferHycloneSH30256.01Clean lung tissue
Photoshop drawing softwareAdobeProcess images
SCIREQ INEXPOSEEMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.Atomizing device
Upright fluorescence microscopeOlympusBX53Observe the slice

References

  1. Raghu, G., et al. Diagnosis of idiopathic pulmonary fibrosis. An official ATS/ERS/JRS/ALAT clinical practice guideline. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 198 (5), e44-e68 (2018).
  2. Moore, B. B., Hogaboam, C. M.

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