Um modelo de camundongo de fibrose pulmonar induzida por nebulização de bleomicina nasal

Summary

Vários modelos animais de fibrose pulmonar foram estabelecidos usando bleomicina para esclarecer a patogênese da fibrose pulmonar e encontrar novos alvos de drogas. No entanto, a maioria dos modelos de fibrose pulmonar direcionados ao tecido pulmonar tem administração desigual de medicamentos. Aqui, propomos um modelo de fibrose pulmonar uniforme induzida por nebulização de bleomicina nasal.

Abstract

A fibrose pulmonar é característica de várias doenças pulmonares humanas que surgem de várias causas. Dado que as opções de tratamento são bastante limitadas, os modelos de camundongos continuam a ser uma ferramenta importante para o desenvolvimento de novas estratégias antifibróticas. Neste estudo, a administração intrapulmonar de bleomicina (BLM) é realizada por nebulização nasal para criar um modelo de camundongo de fibrose pulmonar que imita de perto as características clínicas da doença. Camundongos C57BL/6 receberam BLM (7 U/mL, 30 min/dia) por nebulização nasal por 3 dias consecutivos e foram sacrificados no dia 9, 16 ou 23 para observar alterações inflamatórias e fibróticas no tecido pulmonar. O BLM aerossolizado nasal atingiu diretamente os pulmões, resultando em inflamação e fibrose pulmonar generalizada e uniforme. Assim, geramos com sucesso um modelo experimental de camundongo de fibrose pulmonar humana típica. Este método poderia ser facilmente usado para estudar os efeitos da administração de vários aerossóis nasais na fisiopatologia pulmonar e validar novos tratamentos anti-inflamatórios e antifibróticos.

Introduction

A fibrose pulmonar é um processo de doença progressiva no qual a deposição excessiva de componentes da matriz extracelular, principalmente colágeno tipo I, no interstício dos pulmões leva ao comprometimento da função pulmonar¹. A fisiopatologia da fibrose pulmonar é complexa e as opções de tratamento são atualmente bastante limitadas. Os modelos de camundongos continuam sendo uma ferramenta importante para estudar os mecanismos patogênicos que contribuem para o surgimento e progressão da doença, bem como novas estratégias para o desenvolvimento de medicamentos.

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Protocol

O Comitê de Estudos Animais do Hospital da Amizade China-Japão (Pequim, China) aprovou todos os procedimentos envolvendo camundongos que foram realizados como parte deste estudo (NO.190108). Os camundongos foram mantidos na sala de animais estéreis do Instituto de Pesquisa Médica Clínica da Amizade China-Japão, com temperatura ambiente de 20-25 °C, umidade relativa de 40%-70%, intensidade de luz animal de 15-20 LX e luz e escuridão alternadas por 12 h/12 h. Os animais tinham livr.......

Discussion

A injeção intratraqueal de bleomicina resulta em uma resposta inflamatória e fibrótica aguda em ambos os pulmões e pode ser considerada uma abordagem eficaz para estabelecer um modelo experimental de camundongo de doença pulmonar intersticial humana. A administração intratraqueal é a via de administração mais comumente utilizada 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
bleomycin	Bioway/Nippon Kayaku Co Ltd	DP721	Fibrosis model drugs
0.9% saline for injection	Baxter Healthcare(Tianjin)Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
1 mL syringe	BD	300481	Anesthetize animals
10% neutral formalin buffer	TechaLab Biotech Company		Fix lung tissue
15 mL centrifuge tube	corning	430790	Prepare for anesthesia
20 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
4 °C refrigerator	New-fly group	BCD-213K	Store drugs
Adobe illustrator cc2020	Adobe		Process images
blue back liquid	Beijing Chemical Works		tissue staining
clean bench	Suzhou Sujie Purifying Equipment Co.,Ltd.		Bleomycin preparation
differentiation fluid	Beijing Chemical Works		tissue staining
Electronic balance	METTLER TOLEDO	AA-160	Prepare for anesthesia
eosin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
Heating pad	HIDOM		Mice incubation
hematoxylin stain	Beijing Yili Fine Chemicals Co,Ltd.		tissue staining
phosphate buffered saline (PBS) buffer	Hyclone	SH30256.01	Clean lung tissue
Photoshop drawing software	Adobe		Process images
SCIREQ INEXPOSE	EMKA Biotech Beijing Co.,Ltd.		Atomizing device
Upright fluorescence microscope	Olympus	BX53	Observe the slice