Fixation de tissu embryonnaire de souris pour l’analyse des cytonèmes

La structure des tissus développementaux et l’homéostasie des tissus postdéveloppementaux dépendent de la livraison contrôlée de signaux cellulaires appelés morphogènes. Les morphogènes agissent de manière dépendante de la concentration et du temps pour spécifier des programmes transcriptionnels distincts qui instruisent et renforcent le destin cellulaire. Un mécanisme par lequel des seuils de signalisation morphogène appropriés sont assurés est la livraison des protéines de signalisation par des filopodes spécialisés appelés cytonèmes. Les cytonèmes sont très minces (≤200 nm de diamètre) et peuvent atteindre des longueurs de plusieurs centaines de microns, ce qui rend leur préservation pour l’analyse d’images fixes difficile. Cet article décrit une méthode raffinée de manipulation délicate d’embryons de souris pour la fixation, l’immunocoloration et la section épaisse afin de permettre la visualisation de cytonèmes à l’aide de la microscopie confocale standard. Ce protocole a été utilisé avec succès pour visualiser des cytonèmes qui relient des compartiments de signalisation cellulaire distincts pendant le développement du tube neural de la souris. La technique peut également être adaptée pour détecter les cytonèmes à travers les types de tissus afin de faciliter l’interrogation de la signalisation développementale à une résolution sans précédent.