Nettoyage optique rapide pour l’analyse à semi-haut débit des sphéroïdes tumoraux

Les sphéroïdes tumoraux deviennent rapidement monnaie courante dans la recherche fondamentale sur le cancer et le développement de médicaments. L’obtention de données concernant l’expression des protéines dans le sphéroïde au niveau cellulaire est importante pour l’analyse, mais les techniques existantes sont souvent coûteuses, laborieuses, utilisent un équipement non standard, provoquent une distorsion de taille importante ou sont limitées à des sphéroïdes relativement petits. Ce protocole présente une nouvelle méthode de montage et de nettoyage des sphéroïdes qui répondent à ces problèmes tout en permettant une analyse confocale de la structure interne des sphéroïdes. Contrairement aux approches existantes, ce protocole prévoit le montage et le nettoyage rapides d’un grand nombre de sphéroïdes à l’aide d’équipements standard et de fournitures de laboratoire. Le montage de sphéroïdes dans une solution de gel d’agarose-PBS au pH neutre avant d’introduire une solution de nettoyage adaptée à l’indice de réfraction minimise la distorsion de taille commune à d’autres techniques similaires. Cela permet une analyse quantitative et statistique détaillée où la précision des mesures de taille est primordiale. De plus, par rapport aux solutions de nettoyage liquide, la technique du gel d’agarose maintient les sphéroïdes fixés en place, ce qui permet la collecte d’images confocales tridimensionnelles (3D). Le présent article explique comment la méthode produit des images bi- et 3D de haute qualité qui fournissent des informations sur la variabilité intercellulaire et la structure sphéroïde interne.