生理的サイズのマイクロ流体培養装置における上皮細胞単層の作製と構造評価

in vitro マイクロ流体実験は、急性呼吸窮迫症候群(ARDS)や人工呼吸器誘発性肺損傷(VILI)などの状態で発生する微小生理学的現象に関する多くの洞察を明らかにする大きな可能性を秘めています。しかし、ヒト肺の細気管支末に生理学的に関連する寸法を有するマイクロ流体チャネルの研究は、特に所与の培養環境内で培地流量を含む適切な細胞培養条件を確立することが困難であるため、現在いくつかの課題に直面している。提示されたプロトコルは、ヒト肺の末端細気管支に生理学的に関連する寸法を有する酸素不透過性マイクロ流体チャネルで培養されたNCI-H441ヒト肺上皮細胞の構造を評価するための画像ベースのアプローチを説明している。ファロイジンベースの糸状アクチン染色を使用して、細胞の細胞骨格構造が共焦点レーザー走査顕微鏡によって明らかにされ、個々の細胞および層状の細胞の視覚化が可能になります。その後の定量は、採用されている細胞培養条件が、さらなる実験に適した均一な単層を産生しているかどうかを判断します。このプロトコルは、マイクロ流体チャネルおよび従来の固定ウェル環境における細胞培養および層評価方法について説明しています。これには、チャネル構築、細胞培養と必要な条件、固定、透過処理と染色、共焦点顕微鏡イメージング、画像処理、およびデータ分析が含まれます。