Aislamiento del mesénquima intestinal murino que resulta en un alto rendimiento de telocitos

El intestino delgado murino, o mesénquima de colon, es altamente heterogéneo, y contiene distintos tipos de células, incluyendo sangre y endotelio linfático, nervios, fibroblastos, miofibroblastos, células musculares lisas, células inmunes y el tipo de célula recientemente identificado, telocitos. Los telocitos son células mesenquimales únicas con largos procesos citoplasmáticos, que alcanzan una distancia de decenas a cientos de micras del cuerpo celular. Los telocitos han surgido recientemente como un importante componente de nicho de células madre intestinales, proporcionando proteínas Wnt que son esenciales para la proliferación de células madre y progenitoras.

Aunque los protocolos sobre cómo aislar el mesénquima del intestino del ratón están disponibles, no está claro si estos procedimientos permiten el aislamiento eficiente de los telocitos. Aislar los telocitos de manera eficiente requiere ajustes especiales de protocolo que permitan la disociación del fuerte contacto célula-célula entre los telocitos y las células vecinas sin afectar su viabilidad. Aquí, los protocolos de aislamiento de mesénquimas intestinales disponibles se ajustaron para apoyar el aislamiento y cultivo exitosos de mesénquimas que contienen un rendimiento relativamente alto de telocitos unicelulares viables.

La suspensión unicelular obtenida se puede analizar mediante varias técnicas, como inmunotinción, clasificación celular, imágenes y experimentos de ARNm. Este protocolo produce mesénquima con propiedades antigénicas y funcionales suficientemente conservadas de los telocitos, y puede ser utilizado para varias aplicaciones. Por ejemplo, se pueden usar para el cocultivo con organoides derivados de ratones o humanos para apoyar el crecimiento de organoides sin suplementos de factor de crecimiento, para reflejar mejor la situación en el tejido original.