CRISPR-Cas9-medierade exakta knock-in-redigeringar i zebrafiskhjärtan

Grupperade regelbundet interspaced korta palindromiska upprepningar (CRISPR) i djurmodeller möjliggör exakt genmanipulation för studier av fysiologiska fenomen. Zebrafisk har använts som en effektiv genetisk modell för att studera många frågor relaterade till ärftlig sjukdom, utveckling och toxikologi på helorgan- och -organismnivå. På grund av det väl kommenterade och kartlagda zebrafiskgenomet har många verktyg för genredigering utvecklats. Effektiviteten av att generera och underlätta att upptäcka exakta knock-in-redigeringar med CRISPR är dock en begränsande faktor. Här beskrivs en CRISPR-Cas9-baserad knock-in-metod med enkel detektering av exakta redigeringar i en gen som är ansvarig för hjärtrepolarisering och associerad med den elektriska störningen, Long QT Syndrome (LQTS). Detta två-en-guide-RNA (sgRNA) tillvägagångssätt skär ut och ersätter målsekvensen och länkar en genetiskt kodad reportergen. Nyttan av detta tillvägagångssätt demonstreras genom att beskriva icke-invasiva fenotypiska mätningar av hjärtats elektriska funktion i vildtyp och genredigerade zebrafisklarver. Detta tillvägagångssätt möjliggör effektiv studie av sjukdomsassocierade varianter i en hel organism. Dessutom erbjuder denna strategi möjligheter för införande av exogena sekvenser av val, såsom reportergener, ortologer eller genredigerare.