In vivo Misurazione luminale del rilascio uroteliale di ATP evocato dalla distensione nei roditori

Si ritiene che l'ATP, rilasciato dall'urotelio in risposta alla distensione della vescica, svolga un ruolo sensoriale significativo nel controllo della minzione. Pertanto, una misurazione accurata del rilascio uroteliale di ATP in un contesto fisiologico è un primo passo importante nello studio dei meccanismi che controllano la segnalazione purinergica nella vescica urinaria. Le tecniche esistenti per studiare il rilascio uroteliale di ATP evocato meccanicamente utilizzano cellule in coltura placcate su supporti flessibili o tessuto vescicale appuntato nelle camere di Ussing; Tuttavia, ognuna di queste tecniche non emula completamente le condizioni nella vescica intatta. Pertanto, è stata sviluppata una configurazione sperimentale per misurare direttamente le concentrazioni di ATP nel lume della vescica urinaria del roditore.

In questa configurazione, le vesciche dei roditori anestetizzati vengono perfuse attraverso cateteri sia nella cupola della vescica che attraverso l'orifizio uretrale esterno. La pressione nella vescica viene aumentata tappando il catetere uretrale mentre perfonde il fluido sterile nella vescica attraverso la cupola. La misurazione della pressione intravescicale viene ottenuta utilizzando un trasduttore di pressione collegato al catetere a cupola della vescica, simile alla configurazione utilizzata per la cistometria. Una volta raggiunta la pressione desiderata, il cappuccio del catetere uretrale viene rimosso e il fluido raccolto per la quantificazione dell'ATP mediante saggio luciferina-luciferasi. Attraverso questa configurazione sperimentale, i meccanismi che controllano la stimolazione meccanica e chimica del rilascio uroteliale di ATP possono essere interrogati includendo vari agonisti o antagonisti nel perfusato o confrontando i risultati tra animali wildtype e geneticamente modificati.