猪视网膜色素上皮细胞原代培养

视网膜色素上皮（RPE）是单层极化色素上皮细胞，位于视网膜的脉络膜和神经视网膜之间。多种功能，包括吞噬作用，营养/代谢物运输，维生素A代谢等，由RPE每天进行。RPE细胞是终末分化的上皮细胞，具有很少或没有再生能力。RPE细胞的缺失会导致多种眼部疾病，导致视力障碍，例如年龄相关性黄斑变性。因此，建立原代RPE细胞的 体外 培养模型，其与 体内 RPE比细胞系更相似，对于RPE细胞的特征和机理研究至关重要。考虑到人类眼球的来源有限，我们创建了一个培养原代猪RPE细胞的方案。通过使用该方案，RPE细胞可以很容易地从成年猪眼球中解离。随后，这些解离的细胞附着在培养皿/插入物上，增殖形成汇合的单层，并在2周内快速重建 体内 上皮组织的关键特征。通过qRT-PCR，证明原代猪RPE细胞表达的多个特征基因与天然RPE组织相当，而这些基因中的大多数在人RPE样细胞ARPE-19中丢失/高度降低。此外，免疫荧光染色显示紧密连接、组织极性和细胞骨架蛋白的分布，以及培养的原代细胞中存在对维生素 A 代谢至关重要的异构酶 RPE65。总之，我们开发了一种易于遵循的方法来培养具有高纯度和天然RPE特征的原代猪RPE细胞，这可以作为了解RPE生理学，研究细胞毒性和促进药物筛选的良好模型。