Uso de imágenes in vivo para detectar fenotipos de morfogénesis en cepas mutantes de Candida albicans durante la infección activa en un huésped mamífero

Candida albicans es un patógeno humano importante. Su capacidad para cambiar entre formas morfológicas es fundamental para su patogénesis; Estos cambios morfológicos están regulados por una compleja red de señalización controlada en respuesta a estímulos ambientales. Estos componentes reguladores han sido muy estudiados, pero casi todos los estudios utilizan una variedad de estímulos in vitro para desencadenar la filamentación. Para determinar cómo se regula la morfogénesis durante el proceso de patogénesis, desarrollamos un sistema de microscopía in vivo para obtener imágenes de alta resolución espacial de organismos sometidos a formación hifal dentro del huésped mamífero. El protocolo presentado aquí describe el uso de este sistema para detectar pequeñas colecciones de cepas mutantes de C. albicans, lo que nos permite identificar reguladores clave de la morfogénesis a medida que ocurre en el sitio de la infección. Se presentan resultados representativos, que demuestran que algunos reguladores de la morfogénesis, como el regulador transcripcional Efg1, tienen fenotipos consistentes in vitro e in vivo, mientras que otros reguladores, como la adenilciclasa (Cyr1), tienen fenotipos significativamente diferentes in vivo en comparación con in vitro.