Humane microglia-achtige cellen: differentiatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen en in vitro live-cel fagocytosetest met behulp van humane synaptosomen

Microglia zijn de residente immuuncellen van myeloïde oorsprong die homeostase in de micro-omgeving van de hersenen handhaven en een belangrijke speler zijn geworden bij meerdere neurologische ziekten. Het bestuderen van menselijke microglia in gezondheid en ziekte vormt een uitdaging vanwege het extreem beperkte aanbod van menselijke cellen. Geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC's) afgeleid van menselijke individuen kunnen worden gebruikt om deze barrière te omzeilen. Hier wordt gedemonstreerd hoe menselijke iPSC's kunnen worden gedifferentieerd in microglia-achtige cellen (iMG's) voor in vitro experimenten. Deze iMG's vertonen de verwachte en fysiologische eigenschappen van microglia, waaronder microglia-achtige morfologie, expressie van de juiste markers en actieve fagocytose. Daarnaast wordt documentatie verstrekt voor het isoleren en labelen van synaptosoomsubstraten afgeleid van menselijke iPSC-afgeleide lagere motorneuronen (i³LMN's). Een live-cell, longitudinale beeldvormingstest wordt gebruikt om de overspoeling van menselijke synaptosomen gelabeld met een pH-gevoelige kleurstof te monitoren, waardoor onderzoek naar de fagocytische capaciteit van iMG mogelijk is. De hierin beschreven protocollen zijn breed toepasbaar op verschillende gebieden die de menselijke microgliabiologie en de bijdrage van microglia aan ziekten onderzoeken.