Et nanobar-støttet lipid dobbeltlagssystem for studier av membrankrumningsfølende proteiner in vitro

Membrankrumning spiller viktige roller i ulike essensielle prosesser av celler, for eksempel cellemigrasjon, celledeling og vesikkelhandel. Det genereres ikke bare passivt av cellulære aktiviteter, men regulerer også aktivt proteininteraksjoner og er involvert i mange intracellulære signaleringer. Dermed er det av stor verdi å undersøke rollen som membrankrumning i regulering av fordelingen og dynamikken til proteiner og lipider. Nylig har mange teknikker blitt utviklet for å studere forholdet mellom den buede membranen og protein in vitro. Sammenlignet med tradisjonelle teknikker tilbyr det nyutviklede nanobar-støttede lipid-dobbeltlaget (SLB) både høy gjennomstrømning og bedre nøyaktighet i membrankrumningsgenerering ved å danne et kontinuerlig lipid-dobbeltlag på mønstrede arrays av nanobarer med en forhåndsdefinert membrankrumning og lokal flat kontroll. Både lipidfluiditeten og proteinfølsomheten for buede membraner kan kvantitativt karakteriseres ved hjelp av fluorescensmikroskopiavbildning. Her introduseres en detaljert prosedyre for hvordan man danner en SLB på fabrikkerte glassflater som inneholder nanobararrayer og karakterisering av krumningsfølsomme proteiner på slike SLB. I tillegg dekkes protokoller for gjenbruk av nanobrikker og bildebehandling. Utover nanobar-SLB, er denne protokollen lett anvendelig for alle typer nanostrukturerte glassbrikker for krumningssensorstudier.