Decifrando o Mecanismo Molecular e a Função das Toxinas Formadoras de Furos Usando Leishmania Major

Compreender a função e o mecanismo das toxinas formadoras de poros (PFTs) é um desafio porque as células resistem aos danos na membrana causados pelos PFTs. Embora as abordagens biofísicas ajudem a entender a formação de poros, elas geralmente dependem de abordagens reducionistas que não possuem o complemento completo de lipídios e proteínas da membrana. As células humanas cultivadas fornecem um sistema alternativo, mas sua complexidade e redundâncias nos mecanismos de reparo dificultam a identificação de mecanismos específicos. Em contraste, o patógeno protozoário humano responsável pela leishmaniose cutânea, Leishmania major, oferece um equilíbrio ideal entre complexidade e relevância fisiológica. L. major é geneticamente tratável e pode ser cultivada a alta densidade in vitro, e qualquer impacto de perturbações na infecção pode ser medido em modelos murinos estabelecidos. Além disso, L. major sintetiza lipídios distintos de suas contrapartes de mamíferos, o que poderia alterar a dinâmica da membrana. Essas alterações na dinâmica da membrana podem ser investigadas com PFTs da família de toxinas mais bem caracterizadas, as citolisinas dependentes de colesterol (CDCs). Os CDCs se ligam ao ergosterol na membrana de Leishmania e podem matar os promastigotas de L. major, indicando que o L. major é um sistema modelo adequado para determinar os mecanismos celulares e moleculares da função da TFP. Este trabalho descreve métodos para testar a função da TFP em promastigotas de L. major, incluindo cultura de parasitas, ferramentas genéticas para avaliar a suscetibilidade lipídica, ensaios de ligação à membrana e ensaios de morte celular. Esses ensaios permitirão o rápido uso de L. major como um poderoso sistema modelo para entender a função da TFP em uma variedade de organismos evolutivamente diversos e semelhanças na organização lipídica.