Isolationsmetode til langsigtede og kortvarige hæmatopoietiske stamceller

Selvfornyelseskapacitet og multi-lineage differentieringspotentiale betragtes generelt som de definerende egenskaber ved hæmatopoietiske stamceller (HSC'er). Imidlertid har adskillige undersøgelser antydet, at funktionel heterogenitet eksisterer i HSC-rummet. Nylige enkeltcelleanalyser har rapporteret HSC-kloner med forskellige celleskæbner i HSC-rummet, der kaldes partiske HSC-kloner. De mekanismer, der ligger til grund for heterogene eller dårligt reproducerbare resultater, er lidt forstået, især med hensyn til længden af selvfornyelse, når rensede HSC-fraktioner transplanteres ved konventionel immunfarvning. Derfor er det afgørende at etablere en reproducerbar isolationsmetode for langsigtede HSC'er (LT-HSC'er) og kortsigtede HSC'er (ST-HSC'er), defineret ved længden af deres selvfornyelse, for at løse dette problem. Ved hjælp af upartisk flertrinsscreening identificerede vi en transkriptionsfaktor, Hoxb5, som kan være en eksklusiv markør for LT-HSC'er i musens hæmatopoietiske system. Baseret på dette fund etablerede vi en Hoxb5-reportermuselinje og isolerede LT-HSC'er og ST-HSC'er med succes. Her beskriver vi en detaljeret protokol til isolering af LT-HSC'er og ST-HSC'er ved hjælp af Hoxb5-reportersystemet . Denne isolationsmetode vil hjælpe forskere med bedre at forstå mekanismerne for selvfornyelse og det biologiske grundlag for en sådan heterogenitet i HSC-rummet.