दीर्घकालिक और अल्पकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल के लिए अलगाव विधि

स्व-नवीकरण क्षमता और बहु-वंश भेदभाव क्षमता को आमतौर पर हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल (एचएससी) की परिभाषित विशेषताओं के रूप में माना जाता है। हालांकि, कई अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि एचएससी डिब्बे में कार्यात्मक विषमता मौजूद है। हाल के एकल-सेल विश्लेषणों ने एचएससी डिब्बे के भीतर विभिन्न सेल भाग्य के साथ एचएससी क्लोन की सूचना दी है, जिन्हें पक्षपाती एचएससी क्लोन के रूप में जाना जाता है। विषम या खराब प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों के अंतर्निहित तंत्र को बहुत कम समझा जाता है, विशेष रूप से आत्म-नवीकरण की लंबाई के बारे में जब शुद्ध एचएससी अंशों को पारंपरिक इम्यूनोस्टेनिंग द्वारा प्रत्यारोपित किया जाता है। इसलिए, दीर्घकालिक एचएससी (एलटी-एचएससी) और अल्पकालिक एचएससी (एसटी-एचएससी) के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अलगाव विधि स्थापित करना, उनके आत्म-नवीकरण की लंबाई से परिभाषित, इस मुद्दे पर काबू पाने के लिए महत्वपूर्ण है। निष्पक्ष बहु-चरण स्क्रीनिंग का उपयोग करते हुए, हमने एक प्रतिलेखन कारक, होक्सबी 5 की पहचान की, जो माउस हेमटोपोइएटिक सिस्टम में एलटी-एचएससी का एक विशेष मार्कर हो सकता है। इस खोज के आधार पर, हमने एक होक्सबी 5 रिपोर्टर माउस लाइन स्थापित की और सफलतापूर्वक एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी को अलग किया। यहां हम होक्सबी 5 रिपोर्टर सिस्टम का उपयोग करके एलटी-एचएससी और एसटी-एचएससी के अलगाव के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। यह अलगाव विधि शोधकर्ताओं को एचएससी डिब्बे में इस तरह की विषमता के लिए आत्म-नवीकरण और जैविक आधार के तंत्र को बेहतर ढंग से समझने में मदद करेगी।