IDG-SW3 cellodling i en tredimensionell extracellulär matris

Osteocyter anses vara icke-proliferativa celler som är terminalt differentierade från osteoblaster. Osteoblaster inbäddade i benets extracellulära matris (osteoid) uttrycker Pdpn-genen för att bilda cellulära dendriter och omvandlas till preosteocyter. Senare uttrycker preosteocyter Dmp1-genen för att främja matrismineralisering och därigenom omvandlas till mogna osteocyter. Denna process kallas osteocytogenes. IDG-SW3 är en välkänd cellinje för in vitro-studier av osteocytogenes. Många tidigare metoder har använt kollagen I som huvudsaklig eller enda komponent i odlingsmatrisen. Men förutom kollagen I innehåller osteoiden också ett grundämne, som är en viktig komponent för att främja celltillväxt, vidhäftning och migration. Dessutom är matrissubstansen transparent, vilket ökar transparensen hos den kollagen I-bildade gelen och därmed hjälper till att utforska dendritbildning genom avbildningstekniker. Således beskriver denna artikel ett protokoll för att etablera en 3D-gel med hjälp av en extracellulär matris tillsammans med kollagen I för IDG-SW3-överlevnad. I detta arbete analyserades dendritbildning och genuttryck under osteocytogenesen. Efter 7 dagars osteogen odling observerades ett omfattande dendritnätverk tydligt under ett fluorescenskonfokalmikroskop. Realtids-PCR visade att mRNA-nivåerna av Pdpn och Dmp1 kontinuerligt ökade under 3 veckor. Vid vecka 4 avslöjade stereomikroskopet en ogenomskinlig gel fylld med mineralpartiklar, i överensstämmelse med röntgenfluorescensanalysen (XRF). Dessa resultat indikerar att denna odlingsmatris framgångsrikt underlättar övergången från osteoblaster till mogna osteocyter.