Påvisning af horisontal genoverførsel medieret af naturlige konjugative plasmider i E. coli

Konjugering repræsenterer en af de vigtigste mekanismer, der letter horisontal genoverførsel i gramnegative bakterier. Dette arbejde beskriver metoder til undersøgelse af mobilisering af naturligt forekommende konjugative plasmider ved hjælp af to naturligt forekommende plasmider som et eksempel. Disse protokoller er afhængige af den differentielle tilstedeværelse af valgbare markører i donor, modtager og konjugativt plasmid. Specifikt omfatter de beskrevne metoder 1) identifikation af naturlige konjugative plasmider, 2) kvantificering af konjugeringshastigheder i fast kultur og 3) diagnostisk påvisning af antibiotikaresistensgener og plasmidreplikontyper i transkonjugante recipienter ved polymerasekædereaktion (PCR). De her beskrevne protokoller er udviklet i forbindelse med studiet af den evolutionære økologi ved horisontal genoverførsel for at screene for tilstedeværelsen af konjugative plasmider, der bærer antibiotikaresistensgener i bakterier, der findes i miljøet. Den effektive overførsel af konjugative plasmider observeret i disse eksperimenter i kultur fremhæver den biologiske relevans af konjugering som en mekanisme, der fremmer horisontal genoverførsel generelt og spredning af antibiotikaresistens i særdeleshed.