Détection du transfert horizontal de gènes médié par des plasmides conjugatifs naturels chez E. coli

La conjugaison représente l’un des principaux mécanismes facilitant le transfert horizontal de gènes chez les bactéries à Gram négatif. Ce travail décrit des méthodes pour l’étude de la mobilisation des plasmides conjugatifs naturels, en utilisant deux plasmides naturels comme exemple. Ces protocoles reposent sur la présence différentielle de marqueurs sélectionnables dans le plasmide donneur, receveur et conjugatif. Plus précisément, les méthodes décrites comprennent 1) l’identification des plasmides conjugatifs naturels, 2) la quantification des taux de conjugaison en culture solide et 3) la détection diagnostique des gènes de résistance aux antibiotiques et des types plasmidiques réplicons chez les receveurs transconjugués par réaction en chaîne de la polymérase (PCR). Les protocoles décrits ici ont été développés dans le contexte de l’étude de l’écologie évolutive du transfert horizontal de gènes, afin de dépister la présence de plasmides conjugatifs porteurs de gènes de résistance aux antibiotiques dans les bactéries présentes dans l’environnement. Le transfert efficace de plasmides conjugatifs observé dans ces expériences en culture met en évidence la pertinence biologique de la conjugaison en tant que mécanisme favorisant le transfert horizontal de gènes en général et la propagation de la résistance aux antibiotiques en particulier.