Rilevazione del trasferimento genico orizzontale mediato da plasmidi coniugativi naturali in E. coli

La coniugazione rappresenta uno dei principali meccanismi che facilitano il trasferimento genico orizzontale nei batteri Gram-negativi. Questo lavoro descrive i metodi per lo studio della mobilizzazione dei plasmidi coniugativi presenti in natura, usando due plasmidi presenti in natura come esempio. Questi protocolli si basano sulla presenza differenziale di marcatori selezionabili nel plasmide donatore, ricevente e coniugativo. In particolare, i metodi descritti includono 1) l'identificazione di plasmidi coniugativi naturali, 2) la quantificazione dei tassi di coniugazione in colture solide e 3) la rilevazione diagnostica dei geni di resistenza agli antibiotici e dei tipi di replicon plasmidico nei riceventi transconiuganti mediante reazione a catena della polimerasi (PCR). I protocolli qui descritti sono stati sviluppati nel contesto dello studio dell'ecologia evolutiva del trasferimento genico orizzontale, per lo screening della presenza di plasmidi coniugativi portatori di geni di resistenza agli antibiotici nei batteri presenti nell'ambiente. L'efficiente trasferimento di plasmidi coniugativi osservato in questi esperimenti in coltura evidenzia la rilevanza biologica della coniugazione come meccanismo che promuove il trasferimento genico orizzontale in generale e la diffusione della resistenza agli antibiotici in particolare.